兔免疫球蛋白液相悬浮芯片的制备及制备条件的优化.pdfVIP

蔡月琴等　 兔免疫球蛋白液相悬浮芯片的制备及制备条件的优化　 第9期 ·981· doi:10．3969/ j．issn．1000-484X．2013．09．020 兔免疫球蛋白液相悬浮芯片的制备及制备条件的优化① 蔡月琴　 王德军　 吴　 蔚　 朱　 亮　 吕建敏　 朱科燕　 陈　 诚　 陈民利 (浙江中医药大学动物实验研究中心/ 比较医学研究中心,杭州310053) 　 　 中国图书分类号　 R392．11　 　 文献标识码　 A　 　 文章编号　 1000-484X(2013)09-0981-05 [摘　 要]　 目的:制备兔的免疫球蛋白液相悬浮芯片并对其制备条件进行优化,为进一步建立兔免疫球蛋白液相悬浮芯 片检测技术提供基础。 方法:分别将亲和纯化的兔IgG、IgM和IgA偶联至荧光编码微球,然后优化捕获抗体的偶联量、检测抗 体、Streptavidin-PE抗体的最佳工作浓度以及微球-血清反应时间、检测抗体反应时间和Streptavidin-PE抗体反应时间等因素, 6 × 建立兔IgG、IgM和IgA液相悬浮芯片。 结果:1.25 10 个荧光微球的最佳偶联抗体浓度分别为10 μg IgG、20 μg IgM和15 μg IgA;biotin 标记的IgG、IgM和IgA检测抗体最佳工作浓度分别为2、2 和5 μg/ ml;IgG、IgM和IgA 的最佳Streptavidin-PE抗体 浓度均为2 μg/ ml;微球-血清、血清-检测抗体及Streptavidin-PE抗体最佳反应时间分别为60、60 和30分钟。 结论:制备荧光 编码微球兔免疫球蛋白悬浮芯片是可行的方法。 [关键词]　 兔免疫球蛋白;荧光微球;液相悬浮芯片;优化 Development of liquid suspension chip of rabbit immune globulins and flexible multi-analyte profiling CAI Yue-Qin,WANGDe-Jun,WU Wei,ZHULiang,LÜJian-Min,ZHUKe-Yan,CHEN Cheng,CHEN Min-Li. Laboratory Animal Research Center,Zhejiang ChineseMedical University,Hangzhou310053,China [Abstract]　 Objective:To optimize the preparation conditions and establish liquid suspension chip of rabbit immune globulins. Methods:TherabbitIgG,IgMandIgAaffinity captureantibodywasconjugatedtodifferentfluorescentencodedmicrospheres,respec- tively. The conjuctional capacity of rabbit IgG,IgM and IgA coupling antibody,the optimal concentration of detection antibody and Streptavidin-PE were optimized. Meanwhilewe also optimized the reaction time of beads-serum,detection antibody and Streptavidin- PE. According to the optimization of preparation conditions,the liquid suspension chip of rabbit IgG,IgM and IgA were developed. Results:The optimal conjuctional capacity of couplingantibodywas 10 μgIgG,20 μgIgMand 15 μgIgA,respectively. Theoptimal concentration detectionantibodywas2 μg/ mlIgG,2 μg/ mlIgM