桑籽发芽过程中1-脱氧野尻霉素的变化及乳汁抗蚜虫研究.pdfVIP

中文摘要 桑树乳汁是一种由桑树乳汁管分泌的特殊物质。它含有蛋白质、糖、脂肪、生物 碱等。桑树中的 1­脱氧野尻霉素 （DNJ）是一种能高效抑制 α –葡萄糖苷酶活性、治 疗糖尿病的天然产物。它主要存在于桑叶、桑枝和桑根中，在桑树种子中也有一定量 的DNJ，具有重要的研究价值。多数研究主要针对桑树的根、茎、叶等器官中的DNJ  的提取与测定，但对桑树生长发育过程中 DNJ 含量的变化规律研究较少。本论文以 桑籽作为实验材料，对桑籽到幼苗发育过程中 DNJ  的变化及桑树乳汁抗蚜虫的特性 进行了研究分析，为桑树乳汁的形成规律以及以桑树为材料的生物抗虫研究打下基 础。  DNJ 含 量 测 定 是 采 用 柱 前 衍 生 化 反 相 高 效 液 相 色 谱 - 紫 外 检 测 法 （RP­HPLC­UV）。桑籽催芽处理，在28～32℃的光照培养箱中培育，待长出两片子 叶时开始分离根、茎、叶，置常温下使其干燥。以65％的乙醇为溶剂提取桑苗、桑树 干种子、浸泡后的种子和刚发芽的种子中的DNJ，9-芴甲基氯甲酸甲酯（FMOC­Cl） 为衍生剂，在pH 8.5的硼酸钾缓冲液中在20℃下进行衍生化反应20min，生成具有紫 外吸收的衍生物DNJ­FMOC。 以乙腈-0.1％醋酸(55：45  ，V/V  )为流动相， 流速为1.0mL  ／min， 柱温为25℃， 荧光检测器激发波长为254nm的RP­HPLC­UV法测定DNJ­FMOC  含量。实验结果显示：衍生物DNJ­FMOC的色谱峰分离效果好，DNJ­FMOC的峰面积 与DNJ浓度呈线性关系。RP­HPLC­UV法测定桑苗中DNJ含量可以作为桑树组织和相 关药物中DNJ含量测定的有效方法。 用RP­HPLC­UV法测定以65％的乙醇为溶剂提取的桑苗根、 茎、 叶、 桑树干种子、 浸泡后的种子和刚发芽的种子中DNJ的含量，结果发现桑树中DNJ含量有很大差异， 种子中DNJ含量较高，随着种子的发育直至发芽后，DNJ含量逐渐减少，之后增加并 趋于稳定。 用RP­HPLC­UV法测定分别以65％的乙醇和0.05mol/L  HCl为溶剂提取桑苗叶片 和茎中的DNJ，结果发现用65%乙醇提取的叶片和茎中的DNJ含量均高于用0.05mol/L  HCl提取的叶片和茎中DNJ含量。 用徒手切片和石蜡切片法观察桑树的结构及乳汁管的分布情况，结果表明，桑树 中的乳汁管是无节乳汁管，在桑树的根、茎、叶中均存在乳汁管，主要分布在皮层和 韧皮部，且在各器官的分布数量有差异。 采用内吸法、浸叶法、浸虫法来测定不同浓度的桑树乳汁对蚜虫的抗性作用。发 现当乳汁浓度为20%时蚜虫的死亡率为最高。结果表明：桑树乳汁对蚜虫有较强的触 杀作用，处理时间越长，蚜虫的死亡率越明显；桑乳汁浓度越高对蚜虫影响越大。 关键词：桑树 乳汁  1­脱氧野尻霉素 蚜虫 I  Abstract  Latex is some special substance that is exuded from plant latex tube. Mulberry latex  mainly  concents  protein,  sugar,  fats,  and  alkaloids.  Mulberry  contains  alkaloids  1­deoxynojirimycin  (DNJ)  which  is  a kind  of  α­glycosidase  inhibitor.  Although  DNJ  mainly exists in leaf、stem and root of mulberry tree, a certain DNJ is found in seeds of  mulberry tree. So mulberry latex has important research value. Most researchers put their  focus onDNJ of root、stem、leaf and bark of mulberry tree that grown tree, but only a few  study measured DNJ content