柞蚕细胞色素P450基因CYP4G25序列的克隆与表达分析.pdfVIP

I ，序列分析，表达分析CYP4G25 柞蚕，细胞色素，关键词： 的真核表达及其功能的进一步研究奠定基础。CYP4G25这为以后对细胞色素 ，得到了稳定的表达目的蛋白均表明被诱导的，检测 blotWestern 电泳和 SDS 经 进行了不同浓度的诱导表达，IPTG 菌株中，用 BL21(DE3) 转入大肠杆菌 体， 表达载 a(+)28pET- 并连接至 ，ORF的CYP4G25法扩增了柞蚕细胞色素 RT-PCR 显差异。 且表达量无明 ，精巢和卵巢 、触角 、丝腺 、血液 、中肠 。表皮 、在脂肪体 ，都有表达 。实验结果显示，选取的组织基本RT-PCR 进行了半定量 基因做内参，Actin以柞蚕 ，cDNA 反转录第一链 M-MLV 以 ，RNA 提取柞蚕不同时期和不同组织的总 基因的表达分析：CYP4G25 2. 域。构建系统进化树分析得到柞蚕和天蚕亲缘关系最近。 个疏水氨基酸组成的跨膜锚定区22 端含有由N 以及C 、螺旋K 、螺旋I 位点，螺旋 含有血红素结合 ：分析氨基酸序列Expasy 通过生物在线网站 。UTR) ’(3 端非编码区 ’3个核苷酸组成的326 以及由 ，8.6 和等电点为63.6KD 个氨基酸，分子量大小为 755编码)开放阅读框ORF( 个核苷酸组成的1674 由、UTR) ’(5 端非编码区’5 组成的 个核苷酸111，包括由GU205081登录号为GenBank ，2112bp 全长CYP4G25 序列。 的全长CYP4G25 新基因P450个1方法克隆获得了RACE-PCR 和RT-PCR 采用 基因的克隆及序列分析：CYP4G25 ．1 基因进行研究，获得的主要结果如下：P450物学和生物信息学方法对柞蚕 利用分子生 。还有很高的药用和食用等经济价值 ，除了作为纺织工业原料利用外 。虫 柞蚕属的泌丝昆 、大蚕蛾科 、属于鳞翅目 ，柞蚕是一种正在开发的野生绢丝昆虫 合成与代谢，具有重要的生物学和遗传学意义。 蜕皮激素和脂肪酸等内源化合物的 、它还参与了昆虫体内保幼激素 ，毒物质的耐受性 其对异生物质的代谢特性导致了昆虫对杀虫剂的抗药性和对植物有 ，取食等过程 、育 发、在昆虫的生命活动中起着十分重要的作用：主要涉及生长P450虫而言，细胞色素 对于昆 。的参与P450真菌和细菌等的研究表明许多不同催化反应都有细胞色素 、植物 、 对动物，参与许多重要的生命过程P450细胞色素。最古老和最庞大的超基因家族之一 是，亿年前的一个共同祖先35基因起源于P450于生物有机体内的重要酶系。细胞色素 为广泛分布P450s) ，monooxygenasesP450 (cytochrome单加氧酶系P450细胞色素 要 摘 Abstract Cytochrome P450 monooxygenase enzymes (cytochrome P450 monooxygenases, P450s) constitute a multigenic superfamily of enzymes which is widely distributed in the organism and is one of the oldest and largest genesuperfamilies. Cytochrome P450s evolved from a common ancestor which has exisited for more than 3.5 billion years. Cytochrome P450s involved in many important life processes of animals, plants, fungi and bact