海岛棉组培过程细胞形态特性与基因表达差异的研究.pdfVIP

海岛棉组培过程细胞形态特性与基因表达差异的研究 摘要 海岛棉组织培养过程的研究对于促进长绒棉分子育种改良工程具有极其重要的意义，目前已有 一些关于陆地棉组织培养过程中形态变化和分子机理的研究报道，但是对于海岛棉组织培养过程的 细胞形态变化和分子机制研究寥寥无几。本研究以海岛棉新海 16 为材料，选取胚性愈伤组织初 期，胚性愈伤组织后期，体细胞胚形态建成初期的愈伤组织和对照无菌苗叶片进行石蜡切片观察和 基因组DNA 提取，初步说明了体胚中出现细胞凋亡现象，接着用DDRT-PCR 方法寻找胚性愈伤初 期的差异表达基因，为今后长绒棉分子育种改良奠定一定分子和细胞学基础。本研究取得的主要结 果如下： 1．选取胚性愈伤组织初期、后期及体细胞胚初期的愈伤组织和对照无菌苗叶片进行石蜡切片 观察，发现体细胞胚初期的细胞形态与对照无菌苗幼叶相似，并且通过测微尺测量细胞壁厚度发 现，两者细胞壁厚度相差不大。而在胚性愈伤初期细胞略微变大， 细胞与细胞间联系紧密，到了 胚性愈伤后期形成独立的细胞团结构。 2．提取胚性愈伤组织初期，胚性愈伤组织后期，体细胞胚形态建成初期的愈伤组织和对照无 菌苗叶片组织的DNA经2%琼脂糖凝胶电泳检测发现胚性愈伤组织后期基因组DNA形成了明显梯状 条带。证实了胚性愈伤组织再分化形成体细胞胚要经历细胞凋亡的阶段。 3．分别提取胚性愈伤组织和对照无菌幼苗下胚轴的总RNA，进行DDRT-PCR ，在胚性愈伤组 织中获得重复性高的条带12条。将这12条差异带与pMDTM18-T Vector连接，转化到DH5a菌株进行 蓝白斑筛选，测序，最后得到胚性愈伤初期的4个阳性差异片段。 4．将4个差异序列在GeneBank上进行blastN 比对，发现这些序列与相似基因的同源性不高，其 中19号序列与玉米淀粉合成酶基因、38号序列与番茄GMPase基因和55号与拟南芥的钙调素结合蛋 白具有一定同源性。BlastX 比对仅38 号序列搜索到与葡萄和拟南芥的一些功能未知蛋白具有同源 性。 关键词：海岛棉；组织培养；细胞形态；表达差异. I The studies of Cell morphology characteristic and difference in gene expression about the developing of tissue in Island Cotton(Gossypium Barbadense L.)G.barbadense Abstract Promoting the improvement about long fiber cotton in molecule breeding to is very important for studying the forming about the tissue of G.barbadense in the paper .There wore the configuration changes and molecule mechanism in the development about G.hirsutum,but a little in G.barbadens.The embryonic callus (EC) of Xinhai 16 was used in this study.the prophase, and the cells in different periods,such as the EC changed into somatic embryo, the early somatic embryo and so on, were compared with the asepsis lamina by abserving the paraffin section a nd DNA .It concluded apoptosis happene