AOEB染料精确称取AO(吖啶橙)、EB各1mg,分别溶于10ml.docVIP

AO/EB染料: 精确称取AO(吖啶橙)、EB各1mg，分别溶于10ml pH7.2 PBS中使之配成100μg/ml的储备液，用前等量混合，备用。AO/EB染色及观察结果：取已经培养好并加样孵育后的预观察细胞悬液 100μl，加入AO/EB染料4μl混匀，置1滴于载玻片，上覆盖玻片，荧光显微镜下观察结果并计数200个细胞统计结果。凋亡的细胞呈现为染色增强，荧光更为明亮，均匀一致的圆状或固缩状、团块状结构。非凋亡细胞核呈现荧光深浅不一的结构样特征。二者形态迥然相异，很易判别。在荧光显微镜下观察，可见四种细胞形态：活细胞(VN)，核染色质着绿色并呈正常结构；早期凋亡细胞(VA)，核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞(NVN)，核染色质着橘红色并呈正常结构；晚期凋亡细胞(NVA)，核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状。凋亡比例=(VA+NVA)/(VN+VA+NVA+NVN)*100% 正常细胞(核染色质结构正常，胞膜完整，着均匀的绿色);早期凋亡细胞(核染亮绿色呈致密斑块或碎片状);晚期凋亡细胞(核染橘红色呈致密斑块或碎片状);坏死细胞(胞膜破损、核膜完整，染色质染均匀的红色) 取AO(100 μg/ml)和EB(100 μg/ml)等体积混匀制成AO-EB荧光染液。将培养细胞用PBS离心洗涤两次,稀释至106/ml,取1　ml细胞悬液(106细胞)离心收集细胞,加