1 色谱理论基础.ppt

A：涡流扩散项，由不等路径造成的色谱峰展宽 A=2λdp 涡流扩散项 均匀性因子 粒径 B：分子扩散项，由于分子的纵向扩散造成的色谱峰展宽 B/u B=2γDg 弯曲因子 扩散系数 C：传质阻力项，由质量交换时间（传质阻力）所造成的色谱峰展宽 （Cg+Cl）u Cg = Cl = 容量因子 液膜厚度 液相扩散系数 气相色谱中的速率方程 我们从速率理论能学到些什么？ 对速率方程的讨论 发展新柱型 选择色谱条件 制备高效柱 影响色谱峰展宽的其他因素 非线性分配 固定相的活性吸附点 柱外效应 4. 色谱条件优化理论 分离度的定义 R越大，说明两组分分离得越好。 由于该定义综合了色谱动力学和热力学因素，可作为色谱柱的总分离效能指标。 分离度（R）方程 增大n、α、k均可提高分离度 为色谱条件的优化提供理论指导 n的影响，如何提高n？ 分离度R与理论塔板数N的平方根成正比关系，增加塔板数，有利于提高分离度。 增加柱长可增加N，改善分离，但分析时间将大大延长，峰产生扩展。 减小塔板高度H： 根据速率方程的启示制备高效柱。 根据速率方程选择合适的色谱条件。 k的影响，如何改变k？ 容量因子越大，分离越好。但当容量因子大于10，k/(k+1)的改变不大，且分析时间延长。k的最佳范围是1k10。 改变容量因子的方法 改变柱温 改变相比，死体积对k/(k+1)的影响很大，死体积大的柱子，分离度将受到很大损失。 在高效液相色谱中，改变流动相的配比也可改变k。 α的影响，如何改变α？ α越大，分离效果越好。增大α是提高分离度最有效的手段。 改变柱温可改变α。 在气相色谱中，增大α最有效的手段是改变固定相，选择合适的固定相种类是解决分离问题的关键。 在高效液相色谱中，改变流动相的种类和配比可改变α，它是改善分离最简便有效的途径。 5.色谱定性与定量分析 人参药材的HPLC图谱 5 1 人参皂苷标准品的HPLC色谱图 Rg1 Rb1 Re 丙二酰基人参皂苷Rb1 5.1 色谱定性分析 利用保留值定性 纯物对照 文献值对照 与其它方法联合定性 离线方式 在线方式 GC-MS、GC-FTIR、LC-MS… 5.2 色谱定量分析 三种常用定量方法 归一化，（校正归一化） 内标法，（内标标准曲线法） 外标法，（单点校正） 峰面积归一化 校正归一化 应用范围： 所有组分都能出峰、检测并分离 优点： 简单、准确，条件/进样量对结果影响不大 缺点： 使用受限 内标法 内标标准曲线法 应用范围：不受归一化那样的限制，适合精确定量 优点： 色谱条件，进样量对结果影响小 缺点：操作相对复杂些 单点校正 应用范围：常规分析 优点：简单方便 缺点：结果的准确性取决于进样的重复性和色谱条件的稳定性 外标法（工作曲线法） 定量误差 样品的代表性 进样误差 色谱柱引起的误差 峰面积测量误差 不确定度 现代色谱分析技术 胡坪 化学与分子工程学院/分析化学教研组 Tel.huping@ 学习资源 1. 书籍 气相色谱（毛细管气相色谱） 液相色谱、 毛细管电泳 平面色谱、 离子色谱、凝胶色谱 色谱联用技术 制备色谱、逆流色谱等 色谱技术在各领域的应用 2. 杂志 J CHROMATOGR A J CHROMATOGR B ADV CHROMATOGR BIOMED CHROMATOGR CHROMATOGRAPHIA J CHROMATOGR SCI J LIQ CHROMATOGR R T 色谱（中文核心期刊） 3. 网站 ，小木虫，丁香园,生物通等 4. 仪器厂商 Agilent，Waters, 岛津等 教学内容和安排 色谱理论基础（6学时） 气相色谱法（4学时） 高效液相色谱法（4学时） 色谱相关技术（2学时） 色谱联用技术（4学时） 毛细管电泳（2学时） 超临界流体色谱法（1学时） 制备色谱（1学时） 高速逆流色谱法（1学时） 多维色谱（1学时） 互动讨论课（4-6学时） 第一章 色谱理论基础 色谱分离基本原理 色谱热力学理论 色谱动力学理论 色谱分离条件优化理论 色谱定性和定量方法 一、色谱分离基本原理 1.什么是色谱法(Chromatography)？ 茨维特的实验 色谱法是一种分离方法。 具有两相——固定相（stationary phase），流动相（mobile phase），两相作相向运动。 将色谱法用于分析中，则称为色谱分析。 Partition coefficient K分配