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实验七 大蒜离体繁殖（理论） 植物离体快速繁殖 又称微体快繁，是指利用植物组织培养技术进行的一种营养繁殖的方法是常规营养繁殖的扩展和延伸 特点： 繁殖数量大，速度快 一、意义与作用 是改良品种、培育新品种的一种手段；获得大量优质苗木的有效方法。 1、繁殖系数高，繁殖周期短，繁殖速度快 2、应用广泛 3、材料用量少，不受季节限制，可工厂化生产 4、能获得无毒苗木无性系 5、木本植物应用潜力大 二、基本程序 分为5个时期 1、稳定的无菌培养体系的建立时期 指从外植体选择、采取、清洗、灭菌、接种和茎芽发生，直到获得茎芽稳定生长和增殖、茎芽扩繁数量可随意控制的时段。 本期目标： ◆成功地无污染接种，并且诱导茎芽发生 ◆提供合适的试管环境使培养物的生长达到稳定 过程包括： ◆外植体选择、外植体灭菌、培养基选定和稳定化培养 2、稳定培养系的增殖、生长和增壮时期 ◆达到稳定状态的培养物通过不断的继代培养进行增殖、到达需求数量 ◆是商品化组织培养的主要时期 分为3个阶段： ◆培养物保存阶段 ◆培养物大量增殖阶段 ◆培养物生长和增壮阶段 基本目标： ◆维持培养物的稳定状态 ◆不断增殖茎丛达到需要数量 措施： ◆调整培养基成分及含量 ◆以细胞分裂素为主，生长素为辅 ◆温度、光照的改变 3、诱导茎芽生根形成小苗时期 使上一期培养的微枝发出不定根，形成完整小苗，便于经过驯化、培养成商品苗。 功能： ◆保证组织培养微枝的生根 ◆安全地从试管内无菌环境转移到试管外有菌环境 茎芽生根诱导的途径： A、试管内生根 培养基总盐浓度低，无机盐含量低，细胞分裂素可不含有，生长素有一定量，降低蔗糖浓度，琼脂含量高 B、试管外生根 优势： 根系发育好，根毛多，木质化程度高，分生能力强，生长速度快，茎干皮层细胞个体较小、液泡小，叶片角质层发达、气孔内陷、抗蒸腾能力和适应能力强，光合能力强 注意： 试管外生根不是万能的，对于难生根植物，试管内生根还是唯一选择。 4、生根小苗移栽和驯化时期 本阶段含两个过程： ◆异养阶段过度到自养阶段 ◆人工环境过度到室外环境 措施： ◆将小苗分级 ◆炼苗：一般1周左右 ◆选定好植场所 ◆严格移栽技术，科学确定移栽时间 ◆移栽后管理 5、商品苗培育时期 经过驯化培养的小苗，可按照一般苗木的培育要求进行培养 三、植物离体无性繁殖中的器官发生方式 有五种方式： 1、不定芽型 a、繁殖率高 b、能保持遗传稳定性 c、缩短繁殖周期 2、器官型 a、繁殖率高，但速度慢 b、遗传性稳定 3、器官发生型 a、繁殖速度快 b、遗传性不稳定，易产生变异 c、愈伤组织是遗传转化、细胞培养或原生质体培养的良好材料 4、胚状体发生型 a、数量多、速度快、繁殖系数高； b、遗传性稳定。 5、原球茎型 指兰属特有的器官发生方式，即外植体经培养产生原球茎，再直接长成植株。 四、影响因素 （一） 内因 1、外植体 ◆基因型 ◆外植体类型及其生理状态 ◆外植体大小 ◆取材植株的年龄及生理状况 2、继代培养次数 ◆继代次数多 ◆器官建成能力下降 ◆根分化和茎分化具有相同规律 3、愈伤组织的遗传特性及生理状态 ◆愈伤组织增殖培养越久或代数越多，转移到分化培养基上时，形态发生就会越困难，甚至丧失 ◆愈伤组织块过大也不利于分化 原因：◆长期培养导致染色体组变化 ◆ 产生多倍体或非整倍体 4、芽的增殖途径 ◆嫩梢扦插增殖途径 关键是外植体芽位的选取 ◆丛生芽增殖途径 ◆器官发生途径 愈伤组织 器官形成 ◆胚状体途径 ◆原球茎途径：兰科植物的增殖 （二） 外因 1、培养基 2、培养条件 无糖组培快繁技术简介 植株生长方式 ◆自养：依靠自身光合作用进行 ◆异养：依靠培养基中糖进行 ◆混养：前二者兼有 糖易导致污染发生 1、技术原理 用人工控制手段，以CO2代替糖作为碳源，提供最适条件，促进植株光合作用，从而促进植物的生长发育，在短时间内，较低生产成本下，快速繁殖大量优质种苗。 2、措施 A、培养容器 设计并使用具有控制湿度、气体的流动、CO2浓度、热的扩散的自动化容器。 特点： 透光性好，便于气体交换，