冯学亮教授课件分析.ppt

虫草酸：具有促进机体新陈代谢，清除自由基，抗过氧化损伤作用； 虫草素：具有抗菌.抗癌活性的核苷类物质，对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。抑制细菌和癌细胞生长。清除自由基，抗过氧化损伤作用,还有一定的降血糖作用; 虫草多糖：能促使淋巴细胞转化，提高血清IgG的抗体含量和机体的免疫功能，增强机体自身抗癌,抑癌的能力。抗纤维化作用; 腺 苷：具有舒张血管、降低血压、减慢心律,对心律有双向调节作用; * * * * * * * * * * 要确证单方冬虫夏草对AA肾损害确具疗效，还必须再进行慢性AAN动物模型整体实验 * 细胞生物学实验证实，益肾软坚散的组分之一 ──虫草菌提取液能拮抗马兜铃酸对近端肾小管上皮细胞系HKC的活化作用[3]。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 我科自拟了由虫草菌粉等8味中药组成的“益肾软坚散”，结果显示，与模型组比较，治疗组大鼠肾组织内高表达的TGF-β1、CTGF、TIMP-1、PAI-1及Ⅰ型胶原均被显著下调。这些研究都显示“益肾软坚散”对AA促肾脏纤维化效应具有肯定拮抗作用。 * AA-Na对HKC的增殖及毒性作用检测 我科既往试验已显示AA-Na40 mg/L既无增殖效应、也无细胞毒性[2, 3, 6]，故本研究实验继续沿用此浓度。 虫草菌液对HKC的增殖及毒性作用检测 用不同浓度的虫草菌液（0、5、10、20、40、80 mg/L）孵育HKC 48h，然后用MTT比色法检测细胞增殖[6],用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞毒性[6]。 * 转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF） 纤溶酶原激活物抑制物-1（PAI-1）、金属蛋白酶组织抑制物-1（TIMP-1） ECM 细胞外基质 虫草菌液可下调AA-Na刺激的HKC促ECM合成因子（TGF-β1、CTGF）及抗ECM降解因子（TIMP-1）的表达。 成纤维细胞合成Ⅰ型胶原增多，都可能是导致慢性AAN肾间质纤维化的重要机制。 百令在基础和临床方面的研究日益受到关注。90年代以来在国家级的杂志上作为论著文章累计150余篇。主要临床功用体现在以下方面： 百令在医学领域的广泛应用 肾内科：有效改善肾功能，拮抗肾纤维化。 移植科：促进细胞增生，防治CsA肾毒性。 呼吸科：降低气道阻力，提高肺顺应性。 肝 科：抗纤维化，抗氧化。 肿瘤科：拮抗毒性，升白，提高机体免疫功能。 内分泌：治疗自身免疫性甲状腺疾病。 等等…… 虫草菌液拮抗马兜铃酸对人近端肾小管上皮细胞的作用 芮宏亮 谌贻璞等 中华肾脏病杂志 2006年8月第22卷第8期 国家自然科学基金项目(No 卫生部属(管)医疗机构临床学科重点项目(2005-2007年度) 方法及材料 采用体外培养的肾小管上皮细胞系HKC细胞。 马兜铃酸钠盐(AA)刺激细胞浓度为40mg/ml。 冬虫夏草菌液由杭州中美华东制药有限公司提供。刺激细胞时药物浓度为10mg/ml。 此二种药物试验前均已进行细胞增殖作用及毒性效应检测(MTT试验及LDH试验)。 芮宏亮 谌贻璞等, 中华肾脏病杂志 2006年8月第22卷第8期 实验指标 CTGF是TGF-β发挥前纤维化活性的一个重要 下游因子。 PAI tPA TIMP 纤溶酶 MMP ECM降解 芮宏亮 谌贻璞等, 中华肾脏病杂志 2006年8月第22卷第8期 实验流程 HKC细胞 A:对照组 B:虫草菌液组 C:马兜铃酸组 D:马兜铃酸 ＋虫草菌液组 刺激12小时后 刺激36小时后 裂解细胞，用RT-PCR测定TGF-β1、 CTGF、PAI-1和TIMP-1mRNA表达 收集上清，用ELISA法测定TGF-β1、 PAI-1和TIMP-1蛋白质表达 裂解细胞，用Western blot测定 CTGF蛋白质表达 统计、分析 芮宏亮 谌贻璞等, 中华肾脏病杂志 2006年8月第22卷第8期 TGF-β1 mRNA 表达变化 A B C D β-Actin TGF-β1 A组：对照组 B组：虫草菌液组 C组：AA组 D组：AA+虫草菌液组 M TGF-beta1 mRNA * # 与对照组比较 *p0.05 与 A A组比较 #p0.05 (n=3) 芮宏亮 谌贻璞等, 中华肾脏病杂志 2006年8月第22卷第8期 TGF-β1 蛋白质表达变化 A组：对照组 B组：虫草菌液组 C组：AA组 D组：AA+虫草菌液组 TGF-beta1 (ng/L) 与对照组比较 *p0.05 与 A A组比较 #p0.05 (n=4) * # * 芮宏亮 谌贻璞