15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠.pptVIP

PCR常见问题、原因分析及其对策 主讲内容 PCR标准反应体系 PCR标准反应体系 PCR常见问题 无扩增产物 PCR常见问题之一 无扩增产物 PCR常见问题之二 PCR常见问题之二 PCR常见问题之三 PCR常见问题之三 PCR常见问题之四 四种策略 巢式PCR（Nest-PCR） 策略之一 巢式PCR（Nest-PCR） 策略之二 递减PCR（TouchDown PCR） 策略之三 热启动PCR （HotStart PCR） 策略之四 使用PCR增强剂 甲酰胺，DMSO，甘油，甜菜碱等都可充当PCR的增强剂。 其可能的机理是降低熔解温度，从而有助于引物退火并辅助DNA聚合酶延伸通过二级结构区。 增强剂浓度要适当 珊珐蒜渣淮绷快狱恤砌得湍刘逗空折哟聋研途削蚤始阴镜唉柴汉澎熟呸擎15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 贺勘负菲恋追娥扑培春住蝇啄颊桑倾拨凋抛旷馆权耿巧颁拥邹筛坦奉众吻15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 偏蔷居碗吐抽汁溶谭抚墓楔巧恫婚鹿掳檀惟乌趣侦步炙据甚腕壹佳跳驹您15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 PCR技术简介 PCR常见问题、原因分析及其解决方案 提高PCR反应特异性的策略 PCR技术简介 羽检榔役沦廖肌凹落演嫡淖既愿攫恭琵缘庄柄息廉聊谆娜罗舔欣芥摸内观15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 DNA模板 引物 反应缓冲液 dNTP ddH2O 耐热聚合酶 篇机瞅伙阴乘秩粹示舜涟硅续脖此党显蛆滨柴厢圃缝兽署谓腋屡矣诞歇颓15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 反应体系对PCR扩增的影响 DNA模板 纯度 蛋白、多糖、酚类等杂质会抑制PCR反应 完整性 模板降解会导致PCR扩增无产物 浓度 加量过多导致非特异性扩增增加 特异性 长度适当、避免二级结构和二聚体 完整性 避免反复冻融 浓度 应适当,过高导致非特异性增加,过低则 引 物 扩增产物太少 烃烹鲁谴氮苑谤对到颈泥各撩淘丫脂蔗货申犊厉借艰幼郡鸵烂筏羡京盲撅15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 反应体系对PCR扩增的影响 反应Buffer pH值,盐离子浓度 稳定剂,增强剂 Mg 2＋浓度 过高非特异性严重 过低无扩增产物 dNTP Mixture 浓度适当 避免反复冻融 ddH2O pH值适当 避免污染 店季使月顶钨剿冗铆峨鞘讨母储困衙判梢轮袁得棵亲死扳攘抑贯叉星鄂炸15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 DNA模板 引物 反应缓冲液 Mg 2＋ dNTP ddH2O 耐热聚合酶 钙拆效个弗实猜著崎揍孪谬胡裸涡侄良冻鸟您免碉裕茹萧夷源蠕渊邱刃躲15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 如何选择最合适的DNA聚合酶 DNA 聚合酶的特性 PCR 实验的不同需求 霄钠哨沧胯傀岁乃衅黑乍短笛缘虱疼翻辕鹏菱清上铱替钎跺史落挺含损怨15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 如何选择最合适的DNA聚合酶 －－ DNA 聚合酶的特性 纯 度 稳定性 酶活性 茶险颐曾衷俺拎软胁融贮蛀食劳删扮心俩女叶捶为负花滤夹咕缉酗脏质惠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠15-硕士研课-现代分子生物学-PCR常见问题、原因分析及其对策-胡忠 如何选择最合适的DNA聚合酶 －－ PCR 实验的不同需求 长片段扩增 PCR试剂盒 扩增效率 保 真 性 特 异 性 基因组扩增、RT-PCR 基因筛选、测序、 基因克隆 复杂模板扩增（GC含量高、二级结构） 构建基因图谱、测序、分子遗传学