云母晶面上准外延生长胶原蛋白纳米线阵列性质探究.docVIP

云母晶面上准外延生长胶原蛋白纳米线阵列性质探究 　　摘要 胶原蛋白纤维与同样具有周期性结构表面的羟磷灰石等矿物质晶体能够通过多种作用在介观尺度上相互识别，从而有效地进行规范骨骼、牙齿等器官生长的生物矿化。在本研究中，反相利用生物矿化原理，开发出一种与热壁外延生长（Hot wall epitaxy）技术效果相似的生物大分子纳米线阵列的简单制备技术，成功地将5～10 μg/mL的天然I型鼠尾胶原蛋白单体溶液在云母晶体的（001）晶面上培育成取向单一且长程有序的胶原蛋白纳米线阵列。原子力显微镜实验结果表明，纳米线阵列随胶原蛋白单体浓度增大而变得致密，但是单条纳米线的宽度与高度较为稳定，分别约为60.0和1.5 nm。有纳米线覆盖的云母晶面亲水性好，晶面接触角由25.8°降为9.5°。基于电子背面散射衍射和透射电子显微镜的分析表征结果，纳米线的取向应沿云母＼[1〖TX-10＼]方向， 更详实地验证了胶原蛋白纳米线的准外延生长机理 关键词 胶原蛋白； 外延生长； 生物矿化； 纳米线； 电子衍射 1引言 外延生长（Epitaxial growth）常指一种矿物质晶体在另一种矿物质晶体表面生长，因而在界面上两种矿物质具有相同晶体结构取向的现象[1～5]。半个多世纪以来，利用外延生长原理在晶体基质表面控制和研究镀膜分子的膜层结构以及生长动力学已成为热门研究领域，并取得了诸多成果[1～13]。二十世纪中后期多种商品化无机发光二极管便是利用液相外延生长技术制备的[6]。近二十年来，结合有机化学中的尺寸与功能可调的分子合成技术， 以及各种微观晶体结构的基质选择，在超高真空背景下利用分子束沉积技术在基质表面控制分子膜层晶体的生长，为获得功能可预测的新型微纳光电材料与器件提供了多种可能性[7～9]。例如，通过热壁外延生长（Hot wall epitaxy）技术将对六联苯（pSexiphenyl）等高量子效率的蓝光小分子材料在云母、ITO等基质表面生成有序的纳米线阵列薄膜[10～13]， 由于长程有序，表现出很强的光学各向异性。该薄膜还能产生光学增益， 获得随机激光，可用于制备有偏振特性的电致发光器件[12，13] 外延生长在生物化学领域并不多见。但在自然界中，有规则重复结构的胶原蛋白纤维能够在介观尺度上与矿物晶体相互识别，从而给生物矿化提供支架，有效地调控矿物晶体生长的启动与阻断，在尺寸与取向方面规范骨骼、牙齿等器官的生长[14，15]。另一方面，反相利用矿物晶体与生物大分子的识别作用，在缓冲溶液中控制无机晶体表面的生物大分子自组装也同样具有可行性[16～19]。这种生物大分子在基质表面的外延生长对深入研究生物大分子功能，合成新型微纳材料，以及制备特异高效的生物探针都具有重要意义[20～22] 本研究以天然I型鼠尾胶原蛋白单体和云母晶体为原料，开发了一种生物大分子在电荷周期性分布的晶体表面通过液相外延生长来合成纳米线阵列的“反相生物矿化”技术。此技术应用方便，无需定向流动的缓冲液培养[16]或复杂缓冲液的配制[17～19]。基于各种成像和分析手段的表征结果，对合成的胶原蛋白纳米线阵列的性质进行了初步探讨 2实验部分 2.1仪器与试剂 Bruker Dimension Icon原子力显微镜和FESP悬臂探针（德国布鲁克公司）， 探针为镀金和铬的硅材质，悬臂与针尖的力常数均为2.8 N/m，针尖高15 μm，锥角25°，曲率半径12 nm； Kruss DSA100液滴形状分析仪（德国Kruss公司）； Auriga FIB聚焦离子束场发射扫描双束电镜（德国Zeiss公司）； 空间分辨率50 nm。FEI Tecnai G2 20 LaB6高分辨透射电镜（美国FEI公司） 5 mg/mL胶原蛋白单体溶液（Rat tail tendon collagen type I，北京索莱宝科技有限公司），溶于6 mmol/L乙酸； Na2HPO4、NaH2PO4、K2HPO4、KH2PO4（CP，国药集团化学试剂有限公司）。2M1 muscovite云母基片（北京中镜科仪技术有限公司）。单面与双面胶带（美国3M公司）。实验用水为自制去离子水，室温电阻率约18 MΩcm 2.2??验方法 使用磷酸盐缓冲溶液配制特定浓度的胶原蛋白单体溶液。将云母片切割成约1 cm×1 cm的方片，用双面胶带粘在载玻片中央，用单面胶带撕开云母片表层， 使其露出新鲜晶面（001），滴上胶原蛋白单体溶液覆盖晶面约15 min后， 除去晶面上的蛋白溶液，并用缓冲溶液清洗晶面1～2次，以除去吸附不牢的蛋白质，接着用缓冲溶液覆盖云母晶面，进行约12 h的培育。完成培育后立即除去晶面上的缓冲溶液，用电热吹风烘干后对晶面上的膜层进行表征 原子力显