产琼胶酶海洋细菌的分离、鉴定及其分解琼胶实验.PDFVIP

生物学通报 2叭1年第46卷第5期 产琼胶酶海洋细菌的分离、鉴定及其分解琼胶实验 王祥红 贾仁洁 张 超 汤志宏 (中国海洋大学海洋生命学院 山东青岛266003) 摘要 产琼胶酶的细菌和琼胶酶在制备原生质体、回收DNA与RNA和产生琼胶寡糖等 有着重要的用途。从石花菜和江蓠等植物表面分离产琼胶酶的海洋细茵并进行纯化，经分子生 物学、形态学与生理生化实验鉴定，分离菌株为假交替单胞茵(Pseud00ceromonas sp．)。将该茵 在2216E培养基平板上划线或点种培养，可见平板出现凹陷现象；滴加碘液后。可见茵落周围 有透明圈，表明茵落周围的琼胶被分解掉了。此法更容易分离得到产琼胶酶的菌株，分解琼胶 的实验现象明显，便于观察。 关键词 琼胶 海洋细菌 琼胶酶 海洋细菌 假交替单胞茵 中国图书分类号：Q331文献标识码：B 琼胶(a雕，或称琼脂、冻粉、洋菜)是由琼脂糖 应用于分子生物学方面回收琼脂糖凝胶中的 DNA和RNA；琼胶酶也可以分解某些海藻的多 (agarose，约占70％)和琼脂胶(agaropectin，约占 30％)组成，琼脂糖是由(1_÷3)一O—B—D一半乳糖和糖，测定其水解产物的结构，进而推测多糖的结 构：琼胶酶也用来分解多种海藻多糖产生琼胶寡 (1_+4)一O一3，6一内醚一d—L一半乳糖交替组成的线 形链状分子：琼脂胶由复杂的长短不一的半乳糖 糖。而一定分子量的琼胶寡糖分别具有抗肿瘤、抗 残基的多糖链组成。其中包含有多种取代基如硫 病毒、增强免疫力等多种作用。 酸基、甲基等，对于其结构的细节还不十分清楚。 本文利用无菌操作技术从海藻中分离产琼胶 天然琼胶主要存在于某些海藻的细胞壁中。因此 酶的海洋细菌．接种于相应的琼胶培养基上来观 琼胶主要是从石花菜、江蓠等红藻植物提制的。琼 察其分解琼胶的现象，现象非常明显，取得良好实 胶的化学性质稳定，一般的微生物不能分解利用； 验效果。 就物理性质而言。琼胶在95℃以上开始熔化，熔化 1 分离 后的琼胶在冷却到45℃时重新开始凝固，所以琼 无菌操作取石花菜或江蓠20 g，用无菌镊子 胶是在微生物的培养基中应用最广的凝固剂。 夹起石花菜在无菌海水中漂洗2．3次。洗去石花 某些细菌能够产生琼胶酶将琼胶分解成小分 菜表层黏附的外来污物；将洗过的石花菜切成1． 子的物质．由于琼胶被分解，这些细菌的菌落周围 2mm3的小块，放入250mL三角瓶内(内装80mL 会出现凹陷或液化。能产生琼胶酶的细菌主要来 无菌海水及玻璃珠8一10粒)，振荡15min，使表 自于海洋．还有一部分来自河流、土壤和污水中。 层的细胞悬浮于海水内，静置片刻。用定量移液器 能够分解琼胶的细菌主要为弧菌属(m南)、假单 移取1mL上清液，加入到9mL的无菌海水中进 胞菌属(Pseudomonas)、假交替单胞菌属(PseudoaJ．行系列稀释．制成10～、10～、10。3等一系列稀释菌 feronlonas)和交替单胞菌属(AJferomonas)的细菌，悬液。用移液器移取不同稀释度的菌悬液各 它们常常分布于海洋中的红藻如石花菜和江蓠等 0．1nlL分别涂布于2216E海洋琼脂平板上(蛋 植物上．因此从海洋的红藻如石花菜和江蓠等植 白胨5g，酵母膏lg，磷酸铁0．1 g，琼脂