猪β-干扰素的原核表达和其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研.PDFVIP

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2017-06-13 发布于湖北
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猪β-干扰素的原核表达和其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研.PDF

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维普资讯第 19卷4期中国病毒学 19(4)：364-368 2004年8月 VIROLOGICA SD叮CA August 2004 猪13一干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究曹瑞兵，包晶晶，周海霞，郑其升，周斌，陈溥言料 (南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，江苏南京 210095) ProkaryoticExpressionofPorcineInterferon-13andItsInhibitionEffecton PorcineEpidemicDiarrheaVirus CAORui—bing，BAOJing-jing，ZHOUHai—xia，ZHENGQi—sheng，ZHOUBin，CHENPu—yan rKeyLaboratoryof AnimalDiseaseDiagnosisandImmunology,MinistryofAgriculture，NanfingAgricultural University，Nanjing210095，China) Abstract：11leporcine N一13genewasamplified bypolymerasechainreaction．11leamplified fragmentwasclonde intopGEM—T-easyvectorandthensequenced．11leresultindicatde htathtecloned genewasacompleteporcine N一13genewiht htecodesforsignalpeptide．whichhadhteidentitiesof 100％ wiht htepo玎一13genepublishde inhteGenBank．AnohterpairofprimersWas designde to sub—clonehtegenecodingporcineⅡ 一13matureproteinandonerarecodonnera 5、terminusWas modifiedtohtebiasde codonsofEcoli．Aftersequencing．htesub—clonde N一13geneWas successfully insertedtoexpressionvectorpRLC nadexpressde inEcoli．hteexpressedproteinwasabout17．3％of htetotalcellprotein．RecombinnatporcineⅡ 一13expressedas inclusionbodywhichWas dissolvde in , 6mol／L guanidinechloridenadsubsqeuentlyre—naturedbydilutingwiht refoldingbuffercontaining GSH nadGSSG Inordertoobtain pureprotein．htere—naturedPO IFN一13waspurlfledby Sepha- crylS一200chromatography．Asaresult，htepurifiedproductwasverifiedtobeofhighcytokineactivity byinhibitingⅡlecyto—pahtogeniceffcet，whichisabout5．6xl0’U／mg．Inaddition，tl1einhibitioneffect