Cdk2在皮肤淋巴瘤中的表达及统计分析论文.docVIP

　　Cdk2在皮肤淋巴瘤中的表达及统计分析论文 【摘要】 目的：探讨Cdk2在皮肤淋巴瘤中的表达及其在肿瘤的发生和发展中的作用。方法: 收集武汉大学人民医院病理科2006～2009 年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40 例, 其中22 例MF、7 例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6 例其他类型的T 细胞淋巴瘤、5 例B 细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,包括10例银屑病、10例副银屑病。采用免疫组织化学方法观察各组组织内Cdk2的表达。利用HPIAS2000图像分析系统测定Cdk2在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：皮肤淋巴瘤中Cdk2呈高表达;癌旁组织中Cdk2呈低表达。图像分析结果显示：皮肤淋巴瘤与皮肤炎症病变之间Cdk2的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P 0.05)。结论：Cdk2异常高表达促进细胞增殖,从而在皮肤淋巴瘤发病过程中起重要作用。 【关键词】 皮肤淋巴瘤; Cdk2; 免疫组织化学; 图像分析 在恶性淋巴瘤与假性淋巴瘤的淋巴结外病变中, 皮肤是最常受侵犯的器官, 虽然皮肤淋巴瘤在某些方面比较特殊, 但仍属于淋巴瘤一类疾病,皮肤淋巴瘤是仅次于胃肠道的第二常见的淋巴结外淋巴瘤1，2。细胞周期与肿瘤发生、发展有密切关系,细胞周期的动态过程有赖于正、负调节因子控制。细胞周期素依赖性激酶(cyclindependent kinase, Cdk)在细胞分化、有丝分裂中起促进作用3，4。为探讨Cdk2 与皮肤淋巴瘤的发生发展的关系及临床意义,本文采用免疫组化的方法对皮肤淋巴瘤中Cdk2表达情况进行了检测,以期为皮肤淋巴瘤的早期诊断和治疗提供参考指标。 1 材料和方法 1.1 材料 1.1.1 材料来源 收集武汉大学人民医院病理科2006年～2009 年手术切除及活检经病理明确诊断的皮肤淋巴瘤蜡块40 例, 其中22 例蕈样肉芽肿(MF)、7 例皮肤间变性大细胞淋巴瘤、6 例其他类型的T 细胞淋巴瘤、5 例B 细胞淋巴瘤。另外20例皮肤炎症病变,.freel组织切片常规脱蜡至水后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;② 抗原修复(柠檬酸缓冲液微波抗原修复法)，室温自然冷却后，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗5×3 min;③ 滴加3%过氧化氢，37℃湿盒孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;④ 正常羊血清37℃湿盒孵育10min以减少非特异性背景;⑤ 甩去多余血清.freelin;⑥ 滴加生物素标记的二抗37℃湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;⑦ 滴加链霉素抗生物素蛋白过氧化物复合物37℃湿盒孵育10min，0.01M PBS(pH 7.4)漂洗3×3 min;⑧ 滴加新鲜配置的DAB显色液显色，光镜下控制反应时间(约3～5 min)，自来水冲洗终止反应;⑨ 苏木素复染，流水冲洗，1%盐酸酒精分色数秒，流水冲洗，0.1%氨水返蓝;⑩ 梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片并镜检; 用PBS代替一抗作为阴性对照组，购买的阳性片作为Cdk2的阳性对照组。 1.2.3 免疫组织化学结果判断 Cdk2以细胞核或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应，阴性对照组除细胞核染成蓝色外，应无棕黄色反应物。采用HPIAS1000 高清晰度彩色病理图文报告管理系统(同济千屏影像公司)对Cdk2的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野(×400) ,测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积,计算阳性面积率(阳性面积率=单位面积中阳性反应的总面积/单位面积中细胞的总面积×100%)。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。 1.3 统计学处理 数据以均数±标准差表示，用SPSS12.0软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK(q) 检验,检验水准α为0.05。 2 结果 皮肤炎症病变组: 皮肤炎症病变内可见少量的棕黄色颗粒, Cdk2表达弱或无表达;皮肤淋巴瘤组: 皮肤淋巴瘤内可见密集分布的棕黄色颗粒，Cdk2表达强。图像分析结果显示：皮肤炎症病变组Cdk2表达的平均光密度和阳性面积率分别为0.0458±0.0015和0.0297±0.0019;皮肤淋巴瘤组Cdk2表达的平均光密度和阳性面积率分别为0.7831±0.0069和0.7436±0.0060。皮肤炎症病变组与皮肤淋巴瘤组Cdk2比较,差异有显著性意义(P 0.05)。见表1。表1 皮肤炎症病变组与皮肤淋巴瘤组Cdk2表达的平均光密度和阳性面积率 3 讨论 恶性淋巴瘤(ML ) 是淋巴结或结外部