Delta模块HLA配型检测方法的建立论文.docVIP

　　Delta模块HLA配型检测方法的建立论文 .freelent of Delta Block Matching Technique Abstract To establish delta block HLA-matching technique，DNA ethod，delta block plified by polymerase chain reaction (PCR)，and PCR product orphism in 104 samples Zhejiang province.The range of DNA fragment length bers of DNA fragments ethod of delta block matching is reliable and can be applied to select donors for the patients to be transplanted.It is the first time to get delta block data of the Han people in China. Key atching; HLA-matching technique; block matching 模块配型技术（block matching）在造血干细胞移植中具有一定的意义。HC）中的非HLA标记与供者相合可以提高存活率，减少急性GVHD的发生，这种非HLA标记的检测技术被称为模块配型。MHC模块包括alpha、beta、gamma、delta 4个模块，delta模块配型是检测HLA-DR和DQ周围的序列。 国外对beta和delta模块配型技术进行了一些研究，但是国内研究较少。参照有关文献［1］，我们建立了delta模块配型技术，并对汉族人群样本进行了分析，现将结果报告如下。 材料和方法 样本来源 随机选取104例浙江汉族非血缘关系的人群，抽取全血，EDTA抗凝待用。23对亲缘关系的HLA-A、-B、-DRB 6位点相合的造血干细胞供、受者和26对非亲缘关系的HLA-A、-B、-DRB 6位点相合造血干细胞供、受者，均来自本中心进行HLA配型的患者和供者。 仪器与试剂 MJ-240型DNA扩增仪（美国MJ公司产品）； PCR缓冲液（10×buffer）、10×dNTP、MgCl2、Taq DNA聚合酶（Roche公司产品）。 引物 参照文献1］ 设计，delta-F为 HEX-5′ GATAGAGAGGATTCTAAATG 3′ ； delta-R为5′ TGGAACAGCCAGAAGGAC 3′，其中delta-F引物5′ 端标记荧光基团HEX。引物由上海基康生物技术公司合成。 DNA抽提方法 按快速盐析法［2］。 PCR扩增 PCR扩增体系 总反应体积为10 μl，其中含10×PCR buffer 1.0 μl，样本DNA 1.0 μl，Taq DNA聚合酶0.4 U；dNTP、MgCl2终浓度分别为0.2 mmol/L和2.0 mmol/L，特异性引物终浓度为0.5 μmol/L。 PCR扩增参数 扩增参数为：95℃预变性5分钟，95℃变性30秒，48℃退火30秒，72℃延伸30秒，35个循环，冷却至4℃。 产物检测 以ROX500作为分子内标，取产物0.5 μl与上样缓冲液1 μl混合，95℃热变性3分钟后速冷，上ABI PRISM 377测序仪以基因扫描（GeneScan）模式进行PAGE电泳，采用Geype软件进行数据分析。 结 果 delta模块扩增 每个样本扩增出不同数目和不同长度的DNA片段。样本扩增出的DNA片段个数为6-32个（附表），长度在81-393 bp之间。这些片段构成每个样本各自独特的基因型（附图）。 delta 模块DNA片段长度分布 delta 模块扩增出DNA片段长度大小不一，相对较为集中分布在81-118 bp，140-175 bp，217-301 bp，340-393 bp 4个区域。其中每个样本有固定的峰：81 bp，91 bp和 163 bp。 delta模块检测的重复性 从这些样本中随机选取10个，重复相同的条件3次，每个样本每次均得到相同数目和长度的片段，说明该方法有良好的重复性。Table.Distribution of delta block in the Han people（略） 造血干细胞移植供受者delta模块配型相合情况 23对亲缘关系供受者中有22对供受者Delta模块相合，1对delta模块不同。26对非亲缘关系的造血干细胞供受者中，6对delta模块相合，20对delta模块不同。 讨 论 造血干细胞移植是治疗白血病、重症再生