DNA修复复合体DNAPK——肿瘤放疗中的药理学靶点论文.docVIP

　　DNA修复复合体DNAPK——肿瘤放疗中的药理学靶点论文 【关键词】 DNA修复； DNAPK抑制剂； 肿瘤； 放疗增敏 目前在研究有关肿瘤细胞对放疗敏感性方面，DNA修复蛋白的抑制剂是一个热点。在修复DNA的蛋白中，DNA依赖的蛋白激酶(DNAPK)参与了多细胞生物的非同源末端连接（NHEJ）过程，能保护由于电离辐射所致双链DNA被破坏的细胞，所以它的特异性抑制剂作为放疗增敏剂倍受关注。本文就DNA损伤修复的机制及DNAPK抑制物的生物学特性进行阐述。 1 概述 为提高肿瘤患者的生存率，应不断选择毒副作用尽量小的综合治疗方法。寻找能有效抑制DNA损伤修复的因子以运用到放疗增敏中，是目前研究的一热点。DNA损伤触发各种细胞应答，其中包括DNA的自我修复.freelis3，4。而DNAPK这个丝/苏氨酸激酶，正是包括催化亚单位DNAPKcs和调节亚单位Ku蛋白两部分的复合物，它通过激活后的构像改变5，产生生物学效应。DNAPKcs是由4127个氨基酸组成的相对分子质量约470000的大分子量蛋白质，其基因位于8q11。其C末端结构域和参与信号传导的磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)有同源性，故属PIKK（PI3K样激酶）家族，其靠近激酶活性区的 30023850位氨基酸处是与ku蛋白相互作用的部位，细胞凋亡时DNAPKcs在肽链中间部位断裂而失活；Ku蛋白是一种自身抗原，由2条多肽链紧密结合在一起形成异二聚体结构，两条肽链分别称Ku70和Ku80。人Ku70基因位于22q13，编码609个氨基酸，相对分子质量约69000；Ku80基因位于2q3334，编码732个氨基酸，相对分子质量约83000。双链损伤(DSBs)修复时，2个Ku分子通过一个预先形成的通道特异性地连接到双链损伤处，分别识别并结合于每一条DNA链末端，然后以ATP依赖的方式沿DNA链分别向两端滑动一小段距离，同时Ku本身所具有的弱解旋酶活性使2个断端局部解链。从而形成KuDNA复合物吸引DNAPKcs到损伤部位4，与之结合并激活其丝/苏氨酸激酶活性，磷酸化参与修复及损伤信号传导的一系列蛋白质，如断端经核酸外切酶修剪、DNA聚合酶填充等，还需通过另一复合物即异二聚物XRCC4/连接酶IV的帮助6，其参与DNA断裂再接的过程；而蛋白Artemis则在发夹末端受损时起一定作用。综上可见,核心因子DNAPK联合其他因子共同参与了NHEJ过程。最终当DNA链一旦连接起来，DNAPK即发生自身磷酸化，使2个亚单位从DNA链上解离。另有研究发现，DNAPK在维持染色体末端端粒的稳定性及防止染色体端端融合等方面起作用。 3 DNAPK的激酶活性 DNAPKcs具较弱蛋白激酶活性7，当DNAPKcs经由Ku/DNA 复合物介导催化后，激酶活性大大增强。虽在其他序列中丝/苏氨酸结构也可发生磷酸化，但一般发生在S/TQ结构。虽尚未发现DNAPK对翻译后的修饰起作用，但它可将体外的Ku和细胞内的XRCC4磷酸化，体外试验也已证实Artemis一旦被磷酸化则将改变其核酶活性。DNAPKcs在细胞经受放疗后会发生自身（包含40个氨基酸的区域和其他位点）磷酸化并被激活8，与Ku解离，这样DNA双链损伤修复的后续加工处理和连接步骤才能继续进行8。有模型研究发现9，10，DNAPKcsC端自身磷酸化可使DNA末端发生自身磷酸化，使完成修复任务的DNAPK从DNA末端分离下来。业已表明DNAPKcs抑制剂可阻碍DNAPK结合在DNA的末端，阻止DNA末端的处理。自身磷酸化是细胞内双链损伤修复过程的关键。在细胞内，DNAPK抑制剂在双链损伤修复过程中不单阻止NHEJ，也阻碍同源重组，这更体现抑制剂作为放疗增敏剂所具有的潜在作用11。 4 DNAPK 是药理学靶点 基于DNAPK的表达或活性的增减与肿瘤细胞对放疗敏感性之间的关系密切，DNAPK作为一个药理学新靶点，DNA修复抑制剂得到广泛研究。细胞突变时，DNAPK表达缺乏导致对放射性药物或电离放射的敏感性增加2。类似地，反义或siRNA转染后DNAPKcs或Ku表达的下降也可导致对双链损伤诱导剂的敏感性增加12。Dongmei Lu等［13］利用siRNA的方法敲除DNAPK的基因，可以抑制TNF介导的Akt及PKCε的磷酸化，加速细胞凋亡，表明PKCε活化Akt需通过DNAPK抗凋亡，且DNAPK可以从Akt开始调节受体激酶凋亡。来源于迟发性放射坏死病人的两个细胞系对双链损伤修复能力的下降与DNAPK活性的下降呈正比14。Tonotsuka等15检测食管癌Ku70、Ku80 以及DNAPKcs的表达，发现这些蛋白的表达较对照组癌旁正常组织都明显增高，而肿瘤内