EGCG抑制肺癌细胞增殖及其机制的研究论文.docVIP

　　EGCG抑制肺癌细胞增殖及其机制的研究论文 孙辑凯 黄立军 常东胜 【Abstract】 AIM: To explore the effect of epigallocatechin3gallate ( EGCG) on the proliferation of lung cancer cells and its mechanism. METHODS: Human lung cancer cell line A549 RNA and protein g/L EGCG (P 0.01). The expression of survivin g/L EGCG. CONCLUSION: EGCG can inhibit the groan lung cancer cells and induce cell apoptosis. Its mechanism may be associated s; survivin; apoptosis 【摘要】 目的： 研究表没食子儿茶素3没食子酸酯(EGCG) 对人肺癌细胞增殖的影响及机制. 方法： 培养肺癌细胞A549，加入EGCG制作细胞抑制曲线； EGCG作用于人肺癌A549细胞株前后通过Hoechst染色检测细胞凋亡. RTPCR 及EM 培养基(含100 mL/L小牛血清, 10万U/L 青霉素, 10万U/L链霉素) ,在37℃ 50 mL/L CO2培养箱内进行培养. EGCG以无血清DMEM培养基稀释冻存于-20℃. 1.2方法 1.2.1细胞毒试验(MTT法)将常规培养的A549细胞用胰蛋白酶消化后制成1×105/L的单细胞悬液，加入96孔细胞培养板中每孔0.2 mL，培养24 h后，换含不同浓度的EGCG培养液，每浓度设6复孔.freelin 后，酶标仪测定各孔的吸光度值(A490 nm) ,按下式计算各用药组的生长抑制率IR(%):生长抑制率IR(%) = (1 -用药组平均A490 nm/对照组A490 nm)×100 %. 1.2.2Hoechst染色EGCG处理48 h后的肺癌细胞与对照组细胞制作细胞爬片，用PBS洗3次，40 g/L多聚甲醛固定30 min，PBS洗3次. 吸弃PBS，加入0.5 mL Hoechst染色液，染色10 min, 染色时摇动数次. 之后吸弃染色液，加一滴抗淬灭液于载玻片上，细胞面朝下轻轻放在载玻片液滴上，荧光显微镜下观察凋亡. 1.2.3survivinRTPCR将EGCG处理48 h后的肺癌细胞与对照组细胞以TRIZOL Reagent提取总RNA，紫外分光光度计准确定量，相同条件下进行反转录survivin上游引物P1: 5′CGGAATTCATGGGTGCCCCGACGTTG 3′；下游引物 P2;5′C GGGATCCTCA ATCCATGGCAGC CAGC3′. 预计片段为420 bp同时以人βactin为内参照. βactin的引物序列为：P1： 5′TGGGCATGGGTCAGAAGG GATTC3′; P2: 5′ATGTCACGCACGCACGATTTCCCG3′， 预计片段为502 bp. PCR条件以94℃变性5 min后，按下述参数循环25次：94℃变性15 s，57℃退火 40 s，72℃延伸1 min. 1.2.4： DNA marker；1：对照细胞组；2：EGCG 60 mg/L作用48 h. 图3EGCG 作用后A549细胞中survivin的 RTPCR检测（略） 2.4TT法体外观察不同浓度茶多酚(I)对人肺癌细胞株(PG)细胞的杀伤作用，结果显示I可明显抑制PG细胞表面CD44，CD54的表达. I对PG细胞和静息血管内皮细胞的黏附性也具有明显的抑制作用，并可抑制黏附分子C7344，CD54的表达，呈剂量依赖关系. I的抗黏附作用可能与其抗肿瘤转移有关. Banerjee 等［6］发现茶多酚可以通过抑制 Cox2，诱导caspase3表达抑制肺癌细胞的生长. 本研究通过细胞毒实验（MTT）发现EGCG很小浓度就能抑制A549细胞的生长，Hoechst染色后，发现肺癌细胞经60 mg/L EGCG处理后部分染色质固缩，在荧光显微镜下，呈现出致密浓染或碎块状浓染，说明凋亡细胞大量增加. 凋亡率明显高于对照组. survivin在许多肺癌组织中表达，是迄今发现的作用最强的凋亡抑制因子［7］. 本研究通过olecular targets for the cancer preventive activity of tea polyphenols［J］. Mol Carcinog, 2006,45(6):431-435. ［