P14ARF在宫颈癌及癌前病变中的表达及其与HPV感染的关系论文.docVIP

　　P14ARF在宫颈癌及癌前病变中的表达及其与HPV感染的关系论文 【摘要】 目的： 探讨P14ARF，HPVDNA在宫颈癌组织中的表达并分析两者的关系. 方法： 用免疫组化SP法检测正常宫颈组织20例、宫颈上皮内瘤样变组织10例、宫颈癌组织50例中的P14ARF的表达. 用PCR法检测同样标本中HPVDNA表达情况. 结果： P14ARF和HPVDNA在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样变组织中的阳性表达率明显高于正常宫颈组织中的表达，差异有统计学意义（P＜0.05）. 在宫颈癌组织中P14ARF阳性表达率与组织学病理分级、肌层浸润深度有关，差异有统计学意义（P＜0.05），其阳性率逐级上升；与临床分期、淋巴结转移无关. HPVDNA的阳性表达率与组织学病理分级、临床分期、肌层浸润深度均无关. P14ARF与HPVDNA的表达呈正相关（r＝0.432, P＝0.002＜0.05）. 结论： P14ARF的异常表达、HPV的持续感染与宫颈癌及癌前病变中的发生、发展密不可分，是宫颈癌新的肿瘤标志物. 【关键词】 宫颈肿瘤；P14ARF；乳头状瘤病毒，人；免疫组织化学；聚合酶链反应 【Abstract】AIM: To study the expressions of P14ARF and HPVDNA in cervical carcinoma and their relationship. METHODS: Immunohistochemical SP method al cervical tissues, 10 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN) and 50 cases of cervical carcinoma. PCR technology e cases. RESULTS: The positive rates of P14ARF and HPVDNA in cervical carcinoma and CIN al cervical tissues(P＜0.05)． P14ARF expression uscular invasion(P＜0.05), but not correlated ph node metastasis(P＞0.05). There uscular invasion(P＞0.05); positive correlation a may contribute to the occurrence and development of the cervical carcinoma. P14ARF is regarded as a nearker of cervical neoplasm. 【Keys; P14ARF; papillomavirus, human; immunohistochemistry; polymerase chain reaction 0 引言 目前.freelL/L甲醛固定，石蜡包埋，切片厚4μm. 免疫组化染色采用SP法，操作步骤严格按试剂盒说明书进行. 1.2.2 HPVDNA提取及扩增石蜡包埋标本切片厚5 μm，5～8片，放入1.5 mL无菌试管内，加入1 mL二甲苯，37℃恒温箱内脱蜡30 min，重复2次；用无水乙醇、无菌生理盐水洗涤. 所有标本采用常规碱裂解法提取HPVDNA，提取加样后反应管置于PCR仪上，先按93℃保温3 min，再按93℃ 45 s→45℃ 45 s→72℃ 60 s，循环35次，最后72℃延伸5 min. 1.2.3 结果判断 ① 免疫组化细胞核或细胞质内出现棕黄色颗粒为p14ARF表达阳性. 按每张切片在40倍显微镜下选定10个视野，每个视野记数100个细胞，并按其染色有无及强弱程度划分为：阳性细胞 5%或无阳性细胞为阴性(-)；阳性细胞6%~25%为弱阳性(+)；阳性细胞26%~50%为阳性()；阳性细胞 50%为强阳性(). ② PCR结果判断在PCR扩增后的反应管中加入4 μL上样缓冲液充分混匀后，取15 μL下层蓝色液体，经含EB的20 mL/L琼脂糖凝胶电泳30 min. 将胶置于紫外检测分析仪上观察，与阳性对照处于同一位置者为人类乳头瘤病毒感染. 统计学处理： 采用SPSS10.0软件系统，运用R×C表的χ2检验、等级资料的秩和检验(KruskalannDM2往返于细胞质和胞核之间，当MDM2p53复合物由胞核进入胞质时，p53通过蛋白蛋白酶体(ubiquitinproteasome)通路(UP通路)降解，而MDM2返回胞核，故核质穿梭对于MDM2能够促进p53基因降解是非常重要的. P14ARF作为调控细