内皮抑素和胶原ⅩⅧ在大鼠心肌梗死后心肌的表达.docVIP

摘要】 目的 探讨内皮抑素和胶原ⅩⅧ在急性心肌缺血后的表达。方法 采用心肌梗死大鼠作为心肌缺血动物模型，心肌梗死大鼠分别在术后第7、14、21、28天处死，留取梗死边缘存活心肌，采用ELISA和RTPCR技术检测缺血心肌中内皮抑素和胶原ⅩⅧ水平，采用免疫组织化学方法测定内皮抑素在心肌内的分布。结果 与对照组比较，内皮抑素和胶原ⅩⅧ在梗死7 d后表达明显增加，至28 d缺血心肌内仍有内皮抑素和胶原ⅩⅧ的表达。免疫组化显示内皮抑素弥散分布于血管内皮细胞、平滑肌细胞和心肌细胞。结论 内皮抑素和胶原ⅩⅧ在心肌梗死后缺血心肌内的表达提示内皮抑素和胶原ⅩⅧ在心肌损伤后心肌内血管新生和冠脉侧支循环形成方面起重要的负性调节作用。 【关键词】 缺血心肌;内皮抑素;胶原ⅩⅧ 　【Abstract】 Objective To explore the expressions of endostatin and collagen ⅩⅧ in infarcted myocardium in the rat. Methods Myocardial infarction (MI) rats were made and killed at 7, 14, 21 and 28 days after MI. Survival myocardium on the edge of MI was reserved. Expressions of collagen ⅩⅧ and endostatin were assessed by RTPCR and ELISA. Expression of endostatin protein in MI was also assessed by immunohistochemistry. Results To compared with control, both collagen ⅩⅧ mRNA and endostatin increased at 7 days after MI, and there were the expressions of collagen ⅩⅧ and endostatin at 28 days in ischemic myocardium. Endostatin protein localized at vascular endothelium, smooth muscle and myocytes. Conclusions Expressions of endostatin and collagen ⅩⅧ after MI play a negative modulation role in the coronary collaterals formation and myocardial angiogenesis after MI. 　　【Key words】 Ischemic myocardium; Endostatin; Collagen ⅩⅧ 　　缺血性心脏病是危害人类健康的主要疾病之一，侧支循环的建立能够缩小心肌梗死面积、改善心功能、增加缺血心肌再灌注。冠脉血管新生和侧支循环形成障碍是影响缺血性心脏病患者预后的主要因素。侧支循环的建立依赖于两个方面，一是由于血管的阻塞导致压力的增加使已经存在的血管桥开放;另一方面是由于慢性缺血诱发的血管新生。促进冠脉血管新生建立丰富的侧支循环是改善冠心病患者预后的重要方法。血管新生是由促血管生成因子和抑血管生成因子共同调控的，内皮抑素是位于血管内皮的胶原ⅩⅧ分解而来的一个内源性抑血管新生因子，特异性抑制内皮细胞的增殖、迁移，并诱导内皮细胞凋亡，其作用受体和信号传递机制尚未十分明确。临床研究表明内皮抑素水平与冠脉侧支循环水平呈负相关〔1，2〕，内皮抑素在缺血心肌中的表达情况尚未见报道，本实验观察缺血心肌中内皮抑素和胶原ⅩⅧ水平的变化。 　　1 材料与方法 　　1.1 心肌梗死模型的复制 　　复旦大学上海医学院实验动物中心提供的SD雄性大鼠(250～300 g)，以3%戊巴比妥钠(45 mg/kg)，腹腔注射麻醉，用无创性缝线结扎左侧冠状动脉前降支制作心肌梗死模型，以结扎部位以下心肌变白搏动减弱且心电图出现ST段弓背向上明显抬高为造模成功。假手术组除未结扎冠状动脉之外，处理同心肌梗死组。存活24 h以上的梗死组大鼠随机分组并分别于第7、14、21和28天处死。采用苏木素伊红染色评价左心室梗死面积，梗死面积小于20%大鼠从实验中剔除。留取梗死区边缘心肌-80℃保存用于ELISA和RTPCR检测，10%甲醛固定用于免疫组织化学(SP)法检测。 　　1.2 方法 　　1.2.1 内皮抑素的免疫组织化学检测 　　切片脱蜡至水，按SP试剂盒说明操作，首先加入