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生物技术通讯990112 页码，1/11 生物技术通讯 LETTERS IN BIOTECHNOLOGY   年 第10卷 第 期 1999 1 Vol 10 No.1 1999 质粒拷贝数的测定方法 周 涛 摘要 在研究生物工程重组蛋白产量的过程中，质粒的拷贝数是一个 需要重点考虑的参数，对它进行精确定量至关重要。本文概述了几种 主要的测定方法的原理和特点。 关键词 质粒拷贝数；测定方法 Determination methods of plasmid copy number Zhou Tao (Institute of Biotechnology, Beijing,100071) Abstract Plasmid copy number, the number of expression vectors in each cell, is a key parameter in the study of productivity of recombinant microorganisms. Recognition of the importance of this parameter has given rise to a number of methods for its determination. this article focuses on the principles and charactistics of these methods. Key words plasmid copy number; determination method 细菌质粒是双链、闭环的DNA分子，是独立于细菌染色体之外进行 复制和遗传的辅助性遗传单位。质粒在一般情况下对宿主细胞的生存 不是必需的，但质粒含有某些基因，可以补充细菌基因的不足，有利 于细菌的生存。质粒DNA的复制要由复制细菌染色体的多种酶共同完 成，在宿主中复制的程度差异很大。质粒拷贝数指的是每个细胞中所 含的质粒的个数。低拷贝数的质粒DNA在宿主细胞分裂前只能复制1～2 次，而多拷贝数质粒可以在细胞分裂前复制成10～200拷贝。 质粒的拷贝数依赖于各种胞内外因素：质粒拷贝数首先决定于自 身的遗传性，控制质粒拷贝数的基因位于一个包括DNA复制起点在内的 质粒DNA的区域内。其次，质粒的拷贝数也受细胞生长条件的影响。细 胞的生长速率增大时，质粒的拷贝数下降，主要是因为在高比的生长 速率下，质粒的复制速度跟不上细胞分裂的速度，从而质粒拷贝数不 断下降 ［1］ 。此外，培养时的温度和培基的组成都对质粒拷贝数有影 响，比如当营养物限制或缺乏时会使质粒的拷贝数下降 ［2］ 。为了降 低高拷贝数质粒的代谢负担，Remaut等构建了一种所谓潜复制的质 粒，在正常情况下每个细胞只有1个拷贝，经诱导后其浓度可达到每个 ［3］ 细胞1000拷贝 。 一般来说，外源基因的表达量随拷贝数的增加而提高，但是当拷 /qikan/periodical.articles/swjstx/swjs... 2007-6-13 生物技术通讯990112 页码，2/11 贝数很大时，拷贝数与发酵目标产物产率的这种关系却不存在了 ［4］ 。这主要有两方面的原因：一方面，高拷贝数时外源基因的表达 量不再由质粒的拷贝数决定，可能是由转录和翻译水平决定的；另一 方面，高拷贝数的质粒往往很不稳定。由于