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动物细胞工程 动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，使细胞生长和增殖。 3.动物细胞生长特性： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） * 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 2.分散成单个细胞 4.过程： 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 5. 原代培养和传代培养；细胞株和细胞系 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 细胞株 细胞系 细胞增值 无限传代 去掉组织间蛋白 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 保证细胞顺利的生长增殖 动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 与植物培养基相比其特点是： （1）液体培养基 （2）含有动物血清 动物体细胞大都生活在液体的环境 2.动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 （3）用于检测有毒物质 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体 培养结果 获得细胞或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 植物细胞和动物细胞培养的比较 1.过程： 诱导方式 物理法 化学法 生物法： 灭活的病毒 仙台病毒 紫外线 丧失感染性 （不感染细胞） 保留融合活性 （诱导细胞融合） 1.过程： 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂种细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 主要用于制备 单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法 （同左） 灭活的病毒 物理（离心、振动、电刺激） 化学（聚乙二醇） 诱导方法 使细胞分散后诱 导细胞融合 去除细胞壁后诱 导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、 植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物、动物细胞融合的比较 抗体 1。抗原 动物体内 刺激 效应B 抗原 动物体内 刺激 效应B 抗体 抗原不纯 抗体不纯 筛选单一效应B细胞 不能增值产生大量抗体 2。特异性差、纯度低； 产量低、反应不够灵敏 设计方案： 一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体 小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖 -化学性质单一、特异性强的抗体。 杂种细胞 ？ ？ 抗原 效应 B细胞 2.制备过程： *