小黄菊抗鞘翅目昆虫转基因研究.pdfVIP

摘 要 夺黄菊(Dendrathema grandiflorum‘Xiao 栽培品系(贡菊、湖菊、小白菊、大自菊、小黄菊、滁菊、毫菊、大马牙、大 怀藜)之～，在溺悫、浙、压、汉苏、安徽、山东、淫j|：等雀均有种檀。小黄蔫 是一种重要韵药翔菊科多年生草本植物，既胃入药，又可加工成多种饮晶，同 时还可供观赏，加强小黄菊育种工作舆有很高的经济效益和社会效益。小黄菊 在栽培过程中常遭受多种害虫侵害，影响生长和菊拖质量。在栽培过程中常豢 需要使瘸杀虫剂寒防止和控制虫害的发生。化学杀虫弃l存在环境污染和残留闯 题，要达到减少或不使用杀虫剂的目的，就需要培育优良的抗虫晶种。传统育 种方法由于基因摩所限丽进展不大，植物基因工程可以将外源基因导入小黄蔫 中，培育出抗虫品种，遵过其它黪基因转化改变其困艺特性，甚至哥戳将其作 为～个生物反应器表达入们所需的蛋白等。转基闳技术的发展为菊花育种提供 了一条新的途径。本研究是将抗鞘翅圈昆虫的Crym型基因导入到菊花中，获 锝撼鞘翅目害皮的楚藐，填枣}无抗鞘翅星昆虫菪花晶静的空自。 本实验研究酋先建立了小黄菊的遗传转化蒋生体系，以小黄菊茎段、叶盘 不同激素浓度组合对外植钵愈伤诱导及不定芽分化的影响，建立了较好的遗传 转能荐生体系。试验结果表鞠小黄菊茎段、时盘最适分化培养基分别为 2 O．1 1 0．1 MS+6-BA mg／L和MS+6一BAmg／L+NAA mg／L+NAA m班；小苗的 MS+NAAO．1 最佳生根培养基为1／2 mg／L，生根率可达100％；40mg／L卡那霉 索霹戮抑铡茎段酶分化，10 mg纯卡那霉素哥以抑制叶片的分纯，20mg／L卡 鄢霉素可戬于市制分化小苗的生校。该研究结果为小黄菊的基因转化工作奠定了 基础。 克隆自Bt886菌株。苏云金杼菌和檬物对遗传密码子的偏好存在很大莲异， modified 的密码子对差异密码子进行了替换，改造得到基因modified cry3。本实验构建 了抗鞘翅目昆虫基因cry3Aa、modifiedcry3的植物表达双元表达载体 cry3。 pBll21-cry3Aa，pBin438-modified 并运稍农杆菌时盘法和基黼枪法对小黄菊进行了转化。当经过农杆菌馒染 后，叶片、茎段分别置于含10 mg／L和40mg／L卡那霉素及附加500 mg几的 件下进行选择培养。每2．3周籍，外植体更换一次选择培养基令其诱导分化， 经多轮继代选择培养筛选工作得到抗性苗。采用基因枪转化时，将轰击后的外 植体转入分化培养基中，在28℃、黑暗墙养2—4d。过渡培养履的外植体转 mg／L(茎段)卡那霉素的分亿培养基中进行选择 入含有10糙g忍(时片)、40 培养，直至再生磁苗。 抗性茵先后经PCR和狭槽杂交进行了分子验涯，最终确定小黄菊转 cry3Aa基因檀株霹棵，转modifiedcry3基因植株5棵。 关键词 小黄菊，矫植体，再生体系，苏云金芽孢杆菌，ery3Aa，modifiedcry3， 农杆菌叶盘法，基因枪法，DNA狭槽杂交 1文献综述 它是～类菲常重要的病 苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis)，其简称B…t 原性细菡，广泛分布在瞧界各缝。苏云金杆菌在芽孢形成过程中产生蛋白质， 并戳晶体方式出现。这些蛋白斌具有特异性的杀虫活性，通常被称为“杀虫晶 体鬃自(insecticid