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广西巴马小型猪活化素βA、βB亚基基因成熟肽序列的克隆及原核表达论文
13。有3个碱基发生了突变:即编码序列的第599位、732位及848位。
根据actiVin
13.、13。基因成熟肽序列,分别设计两对引物,并在上下
游弓l物上分别设计BamHI和EcoRI酶切位点,扩增actiVinB。、§。基因的
I和EcoR
成熟肽序列。经BamH I酶切分别将各个成熟肽序列定向连接到原
IPTG诱导表达ACT融合蛋自。经SOS和WesternBIotting分析,证
Vin
明已成功地表达了acti 13.、B。基因成熟肽序列的融合蛋白(各个片段
的大小约为20KD),此融合蛋白以包涵体的形式表达,.有较高的表达量。诱
导条件优化发现。37C下培养,IPTG诱导的浓度为1mM.诱导5-8h有较好
的效果。
本研究成功克隆了广西巴马小型猪ACT两个亚基基因的部分cDNA序
一步研究活化素的生物学功能及为活化素在生产实践上的应用奠定了基
础。
关键词:广西巴马小型猪活化素活化素B.活化素9。融合蛋自
cDNA AND
CLONING,SEQUENCEANALYSIS
EXPRESSIONOF MATUREPEPTIDEDNA
ACTIVIN
BA/BB
FROM MINI—PIG
SEQUENCESGUANGⅪBAMA
ABSTRACT
oneof
the
Activin(ACT)is superfamily,
transforminggrowth缸ctar-fl(TGF-m
whichjs linked bondbetweentwomature
adimedc byonedisulfide
polypeptide
in maturation
subunits.Activinnot can the and ofmammiferous
onlyparticipategrowth
cells theactiononthe intheactivin/inhibin
germbyregulating pituitary—oVary system.,
but lotsof functionsinuther and
also a biologic tissues liver,kidney
plays including
muscle.ect. ·
Inorderto activinand of foreach were
8A BBgenes,twupairs
get primers gene
RNAs
their intheGeneBank.Thetotal
designe
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