微拟球藻（Nannochloropsis oculata）cDNA文库构建、EST分析及Δ6去饱和酶基因克隆初探.pdfVIP

徽拟球蔫(№栅∞b帅曲ocu／越a)cDNA文库构建、EST分析及A6去饱和酶基因克隆初探 构建、EST分析及△6去饱和酶基因克隆初探 摘要 微拟球藻，单细胞藻类，由于其富含各种蛋白、多不饱和脂肪酸及色素，因 而被认为是高附加值生物，且培养条件简单，易规模化培养，毫无疑问有着巨大 的商业开发潜力。然而，目前对微拟球藻的研究主要集中在堵养、毒理及生理生 化，极少涉及到分子水平。因此，我们构建了微拟球藻的eDNA文库，进行了如 下几个方面的工作： 1)培养 微拟球藻生长的培养基：忱；温度：2味1℃；光照周期：D．L为12：12；光 照强度：70仙mols-I一。 2)eDNA文库构建 微拟球藻于指数生长中期收集并用Tfizol试剂抽提RNA。纯化后并合成 eDNA,与载体连接后转入大肠杆菌。经测定，文库库容为2．5×105克隆，重组率 为95％，PCR检测的eDNA3℃库插入片断主要分布在500．1000 bp之间。 3)EST分析 随机测序了5812个克隆，得到5315个ESTs，其长度在100．716bp，平均大小 为420 冗余序列翻译成氨基酸序列后提交GenBank，通过在数据库中进行相似性检索， 推断的氨基序列与已知的氨基酸序列进行比对。结果有637条序列与数据库提交 的蛋白序列相似度显著，其余的相似度极小。在可被注释的490条非冗余序列中， 发现了9条与脂质合成合代谢有关的NRSs以及亲环素、静双加氧酶类似序列各一 条，此外核糖体和光反应等蛋白占绝大部分。 4)A6去饱和酶基因克隆 采用简ffFPCR策略没有克隆到A6去饱和酶基因，说明微拟球藻的去饱和酶基 因很可能与目前已知的去饱和酶基因有所不同。 总之，本论文所做工作为深入了解微拟球藻生理生化过程奠定了很好的分子 微拟球藻(M埘H∞b帅妇aculata)eDNA文库构建、EST分析及A6去饱和酶基因克隆初探 基础。 关键词：微拟球藻；eDNA文库；表达序列标签：分析；△6去饱和酶；克隆 2 oculata)cDNA文库掏建、EST分析及△6去饱和酶基因克隆初探 徽拟球藻(NM／doropsis eDNA construction、EST library analysis oculataand oilthe desaturase ofA6 primarilystudy cloning gene Abstrct me unicellular eukaryofic Nannochloropsisoculata(Enstigmatophyeeae)，a isconsideredtobe nutritionalvalue toits amountsof alga,which ofhigh owinglarge diversevaluable proteins，polyunsaturatedfattyacids(especiallyEpA)and thatit wellunderconditions has ofmaas pigments．Inrespectgrows c