枯草芽孢杆菌α淀粉酶基因的克隆、表达和分析.pdf

致 谢 本文是在我的导师马向东副教授悉心指导下完成的。除了在选题、 查阅文献、实验技术、论文写作等多方面的具体指导外，导师认真严谨、 一丝不苟、勇于创新的治学精神使我受益匪浅。 在实验过程中，贾新成教授、吴坤院长、陈红歌副教授、吴云汉教 授就实验中出现的问题提出过不少建议。李洪孟书记、李为副书记、高 向阳副院长和王玉兰副院长也给予了很多的关心与帮助。王明道老师、 张世敏老师、宋安东老师、赵柏叶老师、赵玉萍老师、胡渝老师为实验 的顺利进行提供了诸多便利。 从实验的开始到结束，和同学们的互相合作，使试验工作顺利进 行，同时也和他们建立了深厚的友谊。师兄张勇法、师姐柯涛在实验初 始阶段给予很大帮助。在和任艳丽、张建云、许君、刘娜、王艳婕、杨 历军、高德富、谷立坤同学三年的共同学习和生活中，得到他们很多的 帮助。在此谨向关心和帮助我的老师和同学表示衷心的感谢。 最后，谨将我的论文献给我的父母、亲人和我的朋友王海胜。在我 三年求学生涯中，是他们无私的鼓励和支持使我顺利完成了学业，是他 们的爱支持着我克服了许多困难。 蒋培霞 2004年6月 1文献综述 {．1基因壳隆技术方法及进展 1．1．1基因克隆技术概述 基因(gene)是遗传物质的摄基本单位，也是所有生命活动的基础。不论要 揭示菜个基因的功能，还是要改变巢个基因的功能，都必须首先将所要研究的 基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。 一般来说，基因党隆技术包括把来自不同生物的基因月有皇主复制裁力 《茹 每 ㈣ 的载体DNA在体钋人工连接，构建 鬟粼窝l鐾；瞪 措韩瀚辟糍成凝的重组DNA，然蜃送入受体生 物中去表达，从愿产生遗传魏缀窝 状态的转移帮曩掰缝合(懿图l。1 面夸出：摔 骈示)。因姥基因克隆技术又称为分 臻囊瓣纛 l辩鳓霉轳 子竟隆、基因熊无性繁殖、基因操 蠢 撵、耋缝DNA技术熬及基因工程 粼撇赫搿姻舔等。 它的最大特点，就燕戳耋组 DNA的技术，开辟了在短时闷肉改 ；黜簟嫩 造生钫遗传性状的新天遣。它蝼补 篝穗鬻耩蒜瓣赣尊擞鞭粼I蒜酸蜷 了生物种满阊不可途越的漓沟，克 整，．{蕊鞠竞囊蛙鼹缣蠢聪 旅了常规育种的盲目性，使人类有 可能按照需要定简培育生物新晶种，新类罄乃至宅日造自然界从未有邋的新生 物。基因工程正以新的势头快速发展，成为当今生物科学研究颁域中最有生 命力，最弓i入注目的前沿科学之一。 基因克隆技术在短短不过20年的时间内已经取得了许多激动人心的成 果。人类基因组计划(HGP)的迅速进展及几种模式生物基因组测序的相继完成 为人类提供了大量的基因组信息，这已成为人类探索生命奥秘的入手点。同 时也为后基因组时代提供了更富有挑战性的任务。基因组学时代的主要任务 功能基因组学的主要研究目标。但如何利用这些研究成果为人类服务，基因 则是一个重要的资源。克隆化基因不仅可以用来兴旺生命科学工业(如制药业 等)，改良农作物、农畜品种等，还可以对遗传性疾病进行基因治疗，探索疾 病的分子机制和生物发育调控规律“3。由于基因组计划要耗费大量人力、物 力、财力，所以并非每一种生物都可以拿来测序，而且模式生物的基因有时 并不能直接用于其它生物，因而克隆其它生物中对人类有益的基因也变得日 益重要。在这样一个大环境下，克隆基因的技术也随着分子生物学发展的步 伐而日臻完善和多样化。 1．1．2基因克