第3节色谱分析法.doc

第3章 色谱分析法 色谱法早在1903年由俄国植物学家茨维特(M．s．Tswett)分离植物色素时采用。他在研究植物叶的色素成分时，将植物叶子的萃取物倒入填有碳酸钙的直立玻璃管内，然后加入石油醚使其自由流下，结果色素中各组分互相分离形成各种不同颜色的谱带如图3-1所示，这种方法因此得名为色谱法。以后此法逐渐应用于无色物质的分离，“色谱”二字虽已失去原来的含义.但仍被人们沿用至今。1941年以后，马丁(Martin)、辛格(Synge)和詹姆斯(James)等发明了分配色谱的理论和技术成为现代色谱发展的标志。在此基础上，1956年范第姆特(Van Deemter)等提出的色谱速率理论，以及色谱仪器与色谱固定相的发展使高效液相色谱应运而生。1980年以后,现代色谱分析的理论和技术日趋成熟，已成为对复杂体系中组分进行分离分析的主要手段，在药物质量标准的制定，药物检查，纯度测定中有着广泛的应用。 图3-1 柱色谱分离过程示意图 3.1 色谱分析法基础 3.1.1基本概念 1.固定相和流动相 在色谱法中，将填入玻璃管、不锈钢管和纸、玻璃、铝制的薄层内静止不动的一相（固体或液体）称为固定相，不同种类的色谱分析方法有不同的固定相。自上而下或由下而上的运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相，不同的分析方法有不同的流动相。 2.色谱柱 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）或毛细管称为色谱柱。 3.分配系数 各组分在固定相和流动相之间达到平衡时的浓度之比，如公式3-1所示。 （3-1） Kd--分配系数，q、c---溶质在固相和液相中的浓度 Kd是反应组分保留特性的参数，Kd越大，表明组分与固定相的作用强，易于保留；反之，则组分与固定相的作用弱，易于进入流动相而被洗脱。由于不同组分其化学性质各异，就具有不同的保留特性或不同的Kd值，从而通过色谱方法得以分离。 4.色谱流出曲线和基本术语 1）基线在实验操作条件下色谱柱后没有组分流出时的流出曲线称为基线稳定的基线应是 条与横轴平行的直线基反映了仪器主要是检测器的噪声随时间变化的情况色谱峰 流出曲线上突出的部分称为色谱峰图色谱图前沿平坦而后沿陡峭的不对称色谱峰称为前延峰（）正常的色谱峰是对称的峰形曲线（）后延拖尾的不对称色谱峰称为拖尾峰（）两种组分在图谱上完全分离要求这两种组分的色谱峰距离相差足够大组分色谱峰 要窄。 峰高或峰面积用于定量峰位用保留值表示)用于定性区域宽度峰宽用于衡量柱效色谱峰区域宽度 色谱峰区域宽度即色谱峰宽度是色谱流出曲线中的一个重要参数从组分分离的角度眼区域宽度越窄越好通常用三种方法表示色谱峰的区域宽度标准偏差σ 即正态分布曲线上两拐点距离之半亦即 倍峰高处色谱峰宽度的一半 （2）半峰宽度又称半峰宽即峰高一半处色谱峰的宽度由于σ易 于测量使用方便以一般用来表示区域宽度峰底宽度F 即通过色谱峰两侧的拐点所作的切线在基线上的截距σ。 4）保留时间（tR） 组分从进样开始到柱后该组分出现峰值浓度时，所需的时间称为保留时间(retention time，tR)如图3-2在不同位置有不同的保留时间。而不保留组分从进样开始到出柱时，所需的时间称为死时间(void time，tM)。 图3-2 色谱图 5.定量校正因子 色谱定量分析是基于峰面积与组分的量成正比关系但同一种物质在不同类型检测器往往有不同的响应灵敏度, 同样不同物质在同一检测器上的响应灵敏度也往往不同所两个相等量的物质得不出相等峰面积或者说相同的峰面积并不意味着相等物质的量此引入定量校正因子用校正因子把待测物质的峰面积校正成相当于该标准物质的峰面积用校正后的峰面积计算待测物质的含量它的定义是 被测物质单位峰面积所相当物质的质量是标准物质单 位 峰面积所相当物质质量的几倍准确称取一定量的被测组分的对照品和标准物质 配成混合溶液取一定量的混合液行色谱分析测量被测组分的对照品和标准物质的峰面积按求出校正因子 （3-2） 式 中 A为内 标物质的峰面积, A为对照品的峰面积, 为加入内标物质的量,为加入对照品的量薄层色谱法(TLC)是较早应用于中药快速分离和定性分析少量物料的一种非常重要的技术是目前药典中收载最多的鉴别与有关物质检查方法之一在中药的鉴别上高效的应用使得的分离能力大幅度提高TLC是一种快速、灵敏、高效地分离微量物质的方法，是最简单的色谱技术之一，具有操作方便、设备简单价格低廉、分离效率高、专属性好、分析速度快、色谱参数易调整兼具分离鉴定双重功能等特点，在药物分析中应用广泛。最近几年围绕着测定过程的标准化和自动化，薄层色谱技术有了全新的发展，扩大了TLC 技术在药物定性定量分析中的应用。 （3-3） 在一定色谱条件下，Rf值为常数，其值在0～1之间．若某组分Rf=0，表示它不随