重组牛朊病毒和人粒细胞集落刺激因子的色谱复性并同时纯化.pdf

4．采川强…离r交换色谱(sAx)法成JJJ地对8．0t001．L。脲变-m1勺rhG．CSF进iJ： 了复fl：j¨d时纯化，考察了流动十¨中脲浓度、流动4-II的pH值、流迷、氧化 的比活性 曲3．0X】08 IU-mg～，纯度为96．4％，质量刚收牢为49．3％，所 }H时111j为30min。而采用稀释法所衙rhG—CSF的比活性．为O．93×108 1U 1i但典 mg～，质引·』收率为32．7％，所川时IhJ为9h。‘j稀释法棚比，SAX 有较高的复性效率，『fIJ且省略了通常稀释复性方法eI，的稀释、离心除沉淀、 浓缩和上样等步骤。 rhG．CSF 5．将弱阴离子交换(WAX)色潜饼羽f fj勺复性并同时纯化，该法可在进 样时生成沉淀的条件下正常进行色谱操作。研究了流动相中脲浓度、赫种类、 缓冲液、流动相的pH值、流速、氧化还原对浓度比例等埘WAX色谱饼对 IU·m参1，纯度为95，8％，质量回收率为29，4％，所用时n≈为25rain。 了流动相中脲浓度、流动相pH、缓冲液种类和“。汕浓度对rhG．CSF复性的 影响。在优化的条件下，所得rhG-CSF的比活性为2．3x 108IU．m91。，纯度为 IU 比活性仅为O．81×】08 rmg～，质量回收率为27．2％，所用时川为9h。这也是 首次将IMAC用于非融合蛋白的复性。 铵浓度、缓冲液种类、流动棚pH值、流速和同定棚等对rhG．CSF复性的影 响。在优化的条件下，经一步HPHIC后，难28 min内rhG—CSF可以得到复 性，并同时得到纯化，其比活为2．1×108 IUmg～，纯度为96．8％，复性及纯 周期短，容易放大，可应川于rhG．CSF的人胤模生产。 8．对HPHIC复性rhG—CSFfI‘J2E艺进行了放大，川10×200mlTl I．D．HPHIC色谱 饼在孙Ik规模．I-x．．t rhG—CSF进行了复性j¨㈣怡E化，埘f究了流速、，世始硫酸 n31]1I 铵浓度、梯度时nq和进样疗』℃等刈复悱过袱的ji髟J4玑10×200D．HPHIC 6 色谱饼基本上可以负载体积为200mL，总蛋白含量约为lg的rhG—CSF的 8．0 4％，质量回收率为36．9％，所用时M为140min。 纯度大于95 液相色谱法用于含二硫键的重组蛋白rhG．CSF的复性并同时纯化而言‘，用SAX、 其中以SAX法所得结果最好，但因其所用基质为软基质，流速不宜太大，用于 工业生产时，耗时太长。用HPHIC法虽然质量回收率低于脲梯度SEC法，且与 SAX法相当．但HPHIC色谱饼法容易工业放大。另外，在用LC法进行复性时， 均不可避免地会产生蛋白沉淀，沉淀积累后就会使柱压急剧升高，甚至会将色谱 柱堵塞，使LC复性过程不能I卜．常进行。而HPHIC色谱饼法可在迸样时生成沉 淀的条件下正常进行色谱复性操作，而且可以采用间歇溶解沉淀的方法回收沉淀 的蛋白，对其重新进行复性，从而提高复性率。指出固定相对蛋白质的复性有很 大的影响。还对折叠液相色谱的发展进行了展望。 关键词：基因工程，重组牛朊病毒，重组儿粒细胞集落刺激因子，溶解，蛋白复 性．排阻色谱，离子交换色谱，固定化会属离子亲合色谱，疏水色谱，色谱饼， 工业化．