黄瓜贝壳杉烯氧化酶基因CKO的克隆及其表达分析.pdfVIP

园 艺 学 报 2012 ，39 （6 ）：1131 –1140 http: // www. ahs. ac. cn Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com 黄瓜贝壳杉烯氧化酶基因 CKO 的克隆及其表达 分析 * ** 胡宏敏，蒋芳玲 ，曹 雪，吴 震 ，王广龙 （南京农业大学园艺学院，农业部华东地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，南京 210095 ） 摘 要：以‘戴多星’黄瓜为试材，应用同源克隆和 RACE 技术从茎尖中得到赤霉素合成的关键 酶——贝壳杉烯氧化酶（KO ）基因 cDNA 全长序列，命名为 CKO，GenBank 登录号为 JN792591 ，其长 度为 1 895 bp，开放阅读框（ORF ）编码519 个氨基酸，相对分子量为 59.211 kD，等电点（PI ）8.45。氨 基酸同源性分析发现，CKO 与苦瓜的 KO 同源性最高，达 84%；序列结构分析表明，CKO 属于细胞色素 超家族 P450 系，具有细胞色素 P450 的血红素结构域FXXGXRXCXG 和跨膜结构域。实时荧光定量分析 表明，CKO 在遮荫的徒长苗中表达量最高，是正常苗的 5.18 倍，在遮阴条件下喷施多效唑可降低期表达。 关键词：黄瓜；贝壳杉烯氧化酶；基因；克隆；表达分析 中图分类号：S 642.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X （2012 ）06-1131-10 Cloning and Expression Analysis of ent-kaurene Oxidase Gene CKO in Cucumber * ** HU Hong-min ，JIANG Fang-ling ，CAO Xue，WU Zhen ，and WANG Guang-long （College of Horticulture，Nanjing Agricultural University ，Key Laboratory of Biology and Germplasm Enhancement of Horticultural Crops in East China ，Ministry of Agriculture ，Nanjing 210095 ，China ） Abstract ：With homologous cloning and RACE technology ，ent-Kaurene oxidase （KO ），a key enzyme in the pathway of gibberellins biosynthesis，was cloned from the shoot tip of ‘Deltastal ’（Cucumis sativus L. ）and named CKO （GenBank accession number ：JN792591 ）. The full cDNA was 1 895 bp in length with an open reading frame （ORF ）encoding a protein of 519 amino acids. The protein molecular weight and isoelectric point were predicted to be 59.211 kD and 8.45 respectively. Amino acids homology analysis indicated that the sequence had 84% similarity with that of Momordica charantia