物理技术及方法在ATP合成酶超分子结构研究中的应用.pdfVIP

物理技术与方法在ATP合成酶超分子结构研究中的应用∗ 朱 杰 孙润广 陕西师范大学物理学与信息技术学院 生物物理研究室 陕西西安 710062 中国 摘 要：现代物理技术与方法的发展为 ATP 合成酶分子的研究提供了丰富而有效的手段。文章介绍了 ATP 合成酶研究中的常用的物理技术与方法如质谱技术、核磁共振技术、X 射线衍射技术、红外光谱 和紫外光谱技术的物理原理及其在 ATP 合成酶研究中的应用，并重点介绍了新兴的非常规手段诸如原 子力显微镜、荧光共振能量转移技术在ATP 合成酶研究中的最新研究成果；通过对比诸多技术与方法 近年来在国内外研究中的进展情况，对各种技术与方法的优缺点进行了阐述。 关键词：物理技术与方法；ATP 合成酶；超分子结构； 中图分类号：O753.2 文献识别号：A 蛋白结构可分为链式和聚集态结构，其中链式结构包括一级结构和二级结构，即高分子 链的组成、构造、构型、分子大小和尺寸、构象与形态；聚集态结构是由多肽链聚集在一起 形成的蛋白内部结构，即蛋白的非晶态、晶态、液晶及多相态结构等。其结构与性能的表征 主要是用物理技术表述蛋白的一级至三级和聚集态结构(四级结构) ，并研究结构与性能间的 关系[1]。上世纪 50 年代以来，蛋白结构的研究受到各相关领域的高度量视，并取得了丰硕 的成果。ATP合成酶是广泛存在于线粒体、叶绿体和细菌中的能量转化核心酶，它利用呼吸 链电子传递产生的质子跨膜转运势能来驱动ADP和Pi合成ATP ，是线粒体氧化磷酸化和叶绿 体光合磷酸化偶联的关键装置，是生命体能源物质合成不可或缺的一种蛋白[2]。到目前为止， 通过生化手段对该酶复合体进行了深入的分离与纯化，已基本确定了该酶的主要组成及其催 化ATP合成的事实[3]；但功能总决定于特定的物理结构，因而人们总是尝试用物理的技术与 方法对酶的空间构象、晶体结构进行研究，以期从结构上去解释ATP合成酶的功能基础[4]。 各种生物物理技术与方法诸如质谱学、光谱学、波谱学、电子显微术、原子力显微术、荧光 共振能量转移技术等在ATP合成酶结构的研究中已取得了显著成功，并极大地推动了该酶的 研究[5-40]。文章主要综述相关技术在ATP合成酶结构与功能研究中的应用。 1.质谱技术 质谱方法(Mass Spectroscope,MS)是通过测定蛋白分子量而进行蛋白鉴定、蛋白修饰和 蛋白相互作用的研究。电喷雾电离(ESI)质谱和软激光解吸(SLD) 电离质谱是研究蛋白分子较 为常用的质谱方法：ESI原理可按电荷残留模型予以描述，带电液滴蒸发，液滴变小，液滴 表面相斥的静电荷密度增大。当液滴蒸发到某一程度，液滴表面的库仑斥力使液滴爆炸[5]。 产生的小带电液滴继续此过程。随着液滴的水分子逐渐蒸发，就可获得自由徘徊的质子化和 去质子化的蛋白分子；SLD是指从激光脉冲中获得能量后，样品蛋白分子以完整的低电荷分 子离子释放。而后，质谱仪通过加速电场测定离子化蛋白分子的质荷比便可得到蛋白分子量 信息。目前占主导的方法是基质辅助激光解吸电离(MALDI)。这一方法是将样品掺入一种低 分子量的结晶基质，基质的最大吸收与激光脉冲波长匹配，其产生的是低电荷的完整气相大 分子，可检测纯度不高的生物分子。MALDI与飞行时间(TOF)联合已经成为鉴定蛋白组分不 可或缺的研究手段[6-7]。 叶绿体H+-ATP合成酶是高等植物和绿藻能量供给的关键装置，经证实，其亚基Ⅲ的低 ∗基金项目:国家自然科学基金资助项目(No; 教育部科学技术研究重点项目(No.104167) 作者简介：朱杰(1980- )男,土家族,湖南张家界人,硕士,助研,陕西省物理学会员,主要从事分子生物物理 与理论生物物理研究。 1 聚体在引导电化学质子梯度向旋转运动的转化中起主要作用，但有关质子转运与旋转运动的 化学计量是否受有机体新陈代谢状态的影响及不同物种之间的异同在学术界还未取得一致 意见。Jurgen等[8]用MALDI-TOF研究了菠菜、绿藻和C.rein