天山雪菊与玛卡胞组织培养实验方案设计.docVIP

天山雪菊、玛卡与人参细胞组织培养实验方案设计 实验材料简介 天山雪菊生长在海拔2600米以上的雪山之隅及喀喇昆仑山脉。是目前新疆惟一与雪莲齐名，具有独特功效的稀有高寒植物。 花瓣呈金黄色，球型花蕊呈棕色，每年八月盛开，花期短促，似昙花一现，生长面积小， 生长环境特殊，产量极小，弥足珍贵。性情温和，能够有效地降血压、血脂。最高等级的雪菊是指生长于海拔3000米左右的高寒地区的雪菊，称之为“高寒雪菊”。 玛卡maea)是十字花科独行菜属植物，别名甜菜根或秘鲁人参，原产于南美洲安第斯高原。肉质根短圆锥形，外表皮呈紫色、奶油色或黄色，富含碳水化合物、蛋白质、不饱和脂肪酸和矿物质元素，主要化学成分是玛卡烯(Maceaene)、玛卡酰胺(Macamide)、硫配糖体(Glucosinolates)等。玛卡营养丰富，既可入药，又能食用，具有增强人体免疫力、快速恢复体力、消除疲劳等神奇功效，玛卡烯、玛卡酰胺被认为是玛卡提取物中具有促进性功能的有效物质之一。 人参是我国名贵中药，堪称当今天然补益药的代表。享有中药之王的美誉，久为世人瞩目，已有两千多年的应用历史。它具有增强免疫力、抗疲劳、保护 心肌细胞、抑制细胞凋亡、抗肿瘤、健胃、抗炎、降糖、降脂等多种功效?，人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约有 40余种；在人参中的含量在4%左右。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 Roots were washed with running tap water for 2 min followed by distilled water. After filtering under vacuum, root fresh weights were recorded, and their dry weights were determined after drying at 60°C for 3 days. 自来水清洗2min后用蒸馏水清洗，真空过滤，称重，60℃干燥三天后称量干重。 提取方法：One g of milled powder of freeze-dried suspension cells was soaked in 80 % MeOH at 60℃ 180 min. The liquid was evaporated and the residue dissolved in H2O and washed twice with ethylether, followed by extraction with H2O-saturated n-butanol. The butanol layer was then evaporated to produce a saponin fraction. 比色法测定人参皂苷的总纯度 标准曲线的制备 精密称取人参皂苷Re标准品30mg，用甲醇定容至100ml，容量瓶中摇匀备用，分别取上述溶液0.0（空白对照管）、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5ml。于6只10ml刻度试管内，分别加甲醇0.5、0.4、0.3、0.2、0.1、0ml摇匀在冰水浴中加入8%香草醛乙醇液0.5ml,77%的硫酸5ml,于60水浴中加热10min立即置于冰水浴中冷却15min，以第一只试管溶液为空白对照，在554nm处测定其余5只试管的吸光度（A）以人参皂苷Re浓度为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线 含量测定精密称取待测样品30mg,用甲醇定容到100ml 容量瓶中精密量取0.3ml于10ml刻度试管中，加0.2ml甲醇，另取10ml刻度试管，加0.5ml甲醇，在冰水浴中向两只试管中同时加入8%香草醛乙醇液0.5ml，77%的硫酸5ml，摇匀60℃水浴中加热10min，冰水浴中15min,在554nm处测定吸光度A，根据标准曲线计算人参皂苷的含量。 玛卡生物碱含量的测定 玛咖总生物碱提取液的制备将愈伤组织样品捣碎，取1g 用甲醇20mL 浸泡24h，过滤，取滤液为提取液。同法提取3 次，合并提取液、浓缩为浸膏。然后用质量分数2% HCl 溶液洗涤溶解，共洗涤3 次，合并酸液，5000r/min 离心10mim。取酸溶液，用质量分数10% NaOH 调至pH10，再用等体积氯仿萃取3 次，合并萃取液、浓缩并定容至1 0mL 所得生物碱提取液用60℃水浴蒸干。然后加入5.0mL 无水乙醇溶解，加入0.01mol/L H2SO4 溶液15mL，甲基红指示液3 滴，用0.02mol/L NaOH 溶液滴 定至黄色。读取消耗的NaOH溶液的量，计算消耗H2S