无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的研究.pdfVIP

生.anlBiol.Science 2006年9月 f25煮鳃 JournalRof漂 Agric Sept.,2006 文童编号:1008一3464(2006)增一0195一02 无卵丘的水牛卵母细胞体外成熟方法的研究 冯贵雪，‘“，杨素芳 ，‘卞桂华’，王晓丽 ，‘石德顺 ‘ (1广西大学动物繁殖研究所，广西南宁530005;2 广西壮族自治区妇幼保健院，广西南宁530003) 摘要:卵母细胞生长发育和成熟调控机理的研究，是生殖生物学领域研究的热点和难点。研究发 现，卵丘细胞的存在与否严重影响卵母细胞的体外成熟质量，且小鼠无卵丘的卵母细胞经体外成熟并 常规体外受精后未能得到 “试管后代”，表明常规体外培养方法明显降低无卵丘的卵母细胞发育潜能。 可能的原因是:(1)卵母细胞与颗粒细胞间的间隙连接丢失，这种连接对卵母细胞的胞质成熟是至关重 要的。(2)皮层颗粒的减少或继续生成路径的障碍。(3)卵母细胞易于贴底，造成变形，从而可能引起 卵母细胞内细胞器机械性移位，造成损伤，且贴底后可能影响卵母细胞与培养基的物质交换。因此，探 明卵丘细胞在卵母细胞体外成熟的作用及机制，探索培养无卵丘的水牛卵母细胞的新方法，对于今后 进一步提高卵母细胞成熟质量具有重大的指导意义。 本研究针对去卵丘细胞的卵母细胞体外培养存在的问题，以卵巢组织、卵丘细胞为介质来模拟卵 母细胞在体内的状态，试验分为5组:M1，直接培养法 (对照组);M2，与单层卵丘细胞共培养法;M3, 未扩展卵丘细胞包围法;M4,扩展卵丘细胞团支撑法;M5,卵巢组织薄片包围法。培养24h后计算 第一极体 (PBl)排出率，随后对这些卵母细胞进行孤雌激活。结果发现:成熟24h时，M4组的第一 极体排出率明显高于M1组和M5组，其他各组间没有显著差异 ((P0.05);孤雌激活结果显示M5组 的卵裂率显著低于M1组 (P0.05)，而M2组与M1组间没有差异 (P0.05);但M3和M4两组的 囊胚发育率显著高于M1组和M5组 (P0.05)。结论:(1)扩展卵丘细胞团支撑法支持无卵丘的水牛 卵母细胞的体外核质成熟，而未扩展卵丘细胞包围法促进卵母细胞胞质的成熟，这可能是通过重新构 建卵丘一卵母细胞间的间隙连接实现的;(2)与单层卵丘细胞共培养法并不能促进无卵丘的水牛卵母细 胞的核成熟及其发育潜力;(3)用卵巢组织包围不能模拟体内卵巢的环境，且卵巢组织可能分泌抑制卵 母细胞胞质成熟的因子。 目前对无卵丘卵母细胞的培养方法的研究甚少，而我们建立的卵丘细胞团包围/支撑法及卵巢组织 包围培养法未见类似的报道。本研究初步建立了水牛无卵丘卵母细胞的有效培养方法，将为研究卵母 细胞生长发育和成熟调控机理提供新的模型，为利用无卵丘的水牛卵母细胞提供理论和技术支持。 关挂词:水牛;无卵丘卵母细胞;体外成熟 中圈分类每:S823.83;S814.6 文献标识码:A 收稿日期:2006-08-080 若金项目:国家自然科学墓金项目(. 作者简介:冯贵雪 (1977一)，男，广西昭平人，博士研究生。 通讯作者:石德顺，研究员，博士生导师;E-mail;ardsshi@gxu.edu.cn. 196 广 西 农 业 生 物 科 学 第25卷 Primarystudyonthematuremethodsofthein vitro buffalodenudedoocytes FENGGui一xue1.2，YANGShu一fang，BIANGui一hua，WANGXiao一1i,，SHIDe一shun (1AnimalReproductionInstitute，GuangxiUniversity,Nanning530005，China; 2MertinityandChidrenHospital，Nanning530003，China) Abstract:Theculturemethods