中国几个金鱼品系血清抗原性的探讨.PDFVIP

　第 22 卷第1 期 水　产　学　报 Vol.22, No.1　 1998 年3 月　　　 　　　　JOURNA OF FISHERIES OF CHINA　　　　　　　　 March, 1998　 中国几个金鱼品系血清抗原性的探讨 梁前进　彭奕欣 (北京师范大学生物系, 　100088) 摘　 　　利用醋酸纤维薄膜电泳、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳比较了鲫和几个金鱼品系(金 鲫、草金鱼、红文鱼、红龙睛和红头蛋鱼)的血清蛋白成分, 并用兔抗鲫血清对这几个品系进行了双向 免疫扩散和对流免疫电泳分析。结果表明:⑴鲫和几个金鱼品系的血清蛋白成分及抗原性在很大 程度上相似;⑵对电泳图谱的详细分析以及用高效价抗血清测定可以看出它们之间还存在不同程 度的差别, 并与演化地位相当一致。 关键词　　金鱼, 血清, 抗原性, 电泳 以中国为原产地的金鱼(Car assius aurat us Var .)是倍受国内外人士欢迎的观赏鱼, 还是 学者们研究种内演化的理想实验材料[陈　桢 1959]。它最早发现于公元265 ～420 年, 经 1000 多年的演变、家化, 现在至少有200 多个品种[徐金生等 1980、1981, 王春元和李延龄 1983]。对于金鱼各品系的比较研究报道很多[梁前进 1995]。 抗原、抗体的结合不仅可在体内也可在体外发生, 产生各种血清学反应。Matsui [1934] 早就发表了金鱼的血清沉淀反应结果, 认为金鱼与鲫反应相同。免疫扩散和电泳结合起来分 析抗原性, 是很有效的手段[龙振洲等 1996],本研究拟以醋酸纤维薄膜(CAM)和SDS-聚丙 烯酰胺凝胶电泳(SDS)、双向免疫扩散和对流免疫电泳测定几个金鱼品系的抗原性, 并用它们同鲫加以比较。 1　材料和方法 1.1　实验动物 雄性大白兔(2 500 ～2 750g)、雄鸡(2000g)和鲫(50 ～65g)购自北京北太平庄市场;金鲫、 草金鱼、红文鱼、红龙睛和红头蛋鱼(均重50 ～65g)来自北京官园鱼鸟市场和中科院发育生物 学研究所。各金鱼品系的英文名称与梁前进和彭奕欣[1994]一致。 1.2　样品制备 鱼血清取自尾动脉和心脏;兔抗血清取自心脏。用作蛋白分子量电泳标记的鸡肉材料取 自胸大肌,其电泳样品制法同梁前进和彭奕欣[1994]。 1.3　电泳 1.3.1　醋酸纤维薄膜电泳 按北京师范大学生物系生物化学教研室[1982]的方法。取试验鱼血清5 μL 分别滴于2cm 收稿日期:1996-09-24 　　 　1期　　　　　　　　　　梁前进、彭奕欣:中国几个金鱼品系血清抗原性的探讨　　　　　　　　　　　　 17 ×8cm 的醋酸纤维膜(浙江黄岩曙光化工厂)无光泽面,距一端1.5cm, 同时电泳, 以近样端为 负极端。用北京试验设备厂的JD—I 型电泳仪, 电极缓冲液是离子强度0.07、pH8.6 的巴比 妥缓冲液, 电泳条件:105V 、40 分钟。染色液用0.086%氨基黑 10B—16.7%甲醇—10%乙 酸,染色时间7 分钟。 1.3.2　SDS—聚丙烯酰胺电泳 采用平林民雄等[1988]的方法, 点样量5μL/样品槽。用北京六一仪器厂DYY—II 电泳 槽,pH8.3 的Tris—Gly (加0.1%SDS)作电极缓冲液。浓缩条件是30mA, 分离条件是 60mA、6 小时。用0.25%考马斯亮蓝—45.5%甲醇—9.2%乙酸染色1 小时。 1.4　抗原、抗体反应 1.4.1　兔抗鲫血清制备 用20 条鲫混合血清作抗原,分别给兔1、2 做每隔一周注射一次的连续四次皮下注射。免 疫注射方法见潘文石等[1982]的方法。抽取对照兔(未免疫)的血清用作阴性对照。收集的抗 血清封存于-20 ℃冰箱或即用。 1.4.2　抗血清效价测定 取4m 熔化的离子琼脂(净化琼脂∶离子强度0.05pH8.6 巴比妥缓冲液=1.5g ∶100m ) 铺于2.5cm×7.5cm 玻片上,凝后打孔:中央一孔,半径5mm 处均匀打6 孔, 孔径