凋亡相关基因pnas2的表达与白血病关系论文.docVIP

　　凋亡相关基因pnas2的表达与白血病关系论文 黄洪晖，朱坚轶，钟济华，王海嵘，钟华，韩洁英，陈芳源 【摘要】 本研究旨在探讨凋亡相关基因pnas2与白血病的关系。应用RTPCR技术检测硫化砷作用前后NB4、K562、U937细胞pnas2基因的表达及急性白血病病人治疗前后pnas2基因表达的变化。结果显示： NB4细胞在硫化砷作用后pnas2表达有明显下调，并呈时间依赖性；而K562及U937细胞在硫化砷作用后pnas2基因的表达无明显变化。急性白血病病人治疗前pnas2基因表达阳性率为100%.freelia Abstract The study ia. The RTPCR ed to detect the expression levels of pnas2 gene in NB4, K562, U937 cells before and after treatment arro patients ia before and after chemotherapy. The results shoedependent manner, but the same oute in K562 and U937 cells after being treated untreated patients ia al control group. After chemotherapy, the expression ission patients, ission patients there ent. It is concluded that the pnas2 gene may be closely related ay consider as a molecular biological remission marker in acute leukemia. Key ia pnas2基因是细胞凋亡相关蛋白的编码基因，有资料显示它是一条与NB4细胞凋亡密切相关的基因，但尚未见具体报道。本实验室在前期工作中，用基因表达谱芯片检测NB4细胞在硫化砷作用前后基因表达的变化，结果发现硫化砷处理后的NB4细胞有34条基因表达发生改变，分别涉及细胞凋亡、细胞周期、细胞信号转导、DNA合成，转录及修复、蛋白质翻译等相关基因，其中与凋亡密切相关的pnas2基因表达下调［1］。本实验基于基因表达谱芯片的结果，采用RT－PCR方法研究硫化砷作用于NB4、K562、U937细胞后pnas2基因的表达变化，并检测了急性白血病病人化疗前后pnas2基因的表达，力图进一步探索pnas2基因与白血病的关系。 材料和方法 血液肿瘤细胞株及培养 取NB4、K562、U937细胞（NB4细胞株由上海血液学研究所陈竺所长馈赠）1×105个细胞/毫升置于不含或含10 mg/L As4S4（美国AlfaAesar公司，纯度99.99%）的新鲜培养液（RPMI 1640， Gibco公司产品）中（含10％小牛血清，1 mmol/L谷氨酰胺，1 mmol/L丙酮酸及100 U/ml青霉素，100 U/ml链霉素），于37℃、5％ CO2、湿空气中培养，2、4、6、8小时后收集细胞。 本院住院及门诊初发急性白血病病人9例，其中男6例，女3例，年龄18-57岁，中位年龄47岁，按MIC分型标准诊断，其中急性淋巴细胞白血病（ALL）1例；急性髓系白血病（AML）8例，包括M2 2例，M3 2例，M4 3例，M5 1例。诱导缓解方案为：对ALL病人采用DVP（柔红霉素，长春新碱，泼尼松）方案；AML病人采用DA（柔红霉素，阿糖胞苷）或MAV（米托蒽醌，阿糖胞苷，鬼臼噻吩甙）或CAG（阿克拉霉素，阿糖胞苷，粒细胞集落刺激因子）等方案；对M3病人采用全反式维甲酸（ATRA）治疗。以完全缓解（CR）作为判断疗效指标。对照组4例，为类白血病反应1例，特发性血小板减少性紫癜病人3例。 单个核细胞的分离 采集患者骨髓液10 ml，肝素抗凝。Ficoll淋巴细胞分离液分离单个核细胞，获得的细胞标本中白血病细胞比例均达80％以上。Ficoll分离法操作如下：抗凝骨髓4-6 ml，用等量生理盐水稀释后，沿管壁缓慢加入已放有4-6 ml Ficoll淋巴细胞分离液的试管中， 400×g室温离心20分钟，吸出单个核细胞层，用生理盐水洗涤2次。如混杂有红细胞，用4-6 ml红细胞裂解液4℃放置8分钟， 100×g离心5分钟，沉淀，加入5 ml生理盐水洗涤，用计数板计数，计算细胞总数。洗涤后细胞沉淀，加入TRIZOL 1 ml， -80℃冷冻保存待用。 总RNA抽提 TRIZOL总RNA抽提试剂盒购自Gibco公司。具体步骤如下：收集5×106细胞，用冰