油料植物光皮树SSR-PCR反应体系优化和引物筛选.PDFVIP

第35 卷 第2 期 经济林研究 Vol. 35 No.2 2017 年6 月 Nonwood Forest Research Jun. 2017 Doi:10.14067/ki.1003-8981.2017.02.012 http: // 油料植物光皮树SSR-PCR反应体系 优化及引物筛选 1 1 2 1 1 3 张路红 ，蒋丽娟 ，陈景震 ，易诗明 ，黄 蓉 ，夏 栗 （1. 中南林业科技大学，湖南 长沙 410004 ；2. 湖南省林业科学院，湖南 长沙 410004 ； 3. 湖南省农林工业勘察设计研究总院，湖南 长沙 410007 ） 摘 要：建立稳定可靠的SSR-PCR 反应体系、筛选具有多态性SSR 引物，是木本油料植物光皮树分子标记辅助 育种与良种选育的重要基础研究。为给SSR 标记技术在光皮树遗传图谱构建、亲缘关系鉴定及分子育种等方面 5 的应用研究奠定基础，利用“Cf-05 ”正反向引物，采用L16 （4 ）正交试验设计和单因素试验相结合的研究方 法，对影响光皮树SSR-PCR 反应体系的主要因素（模板DNA 、引物、dNTPs、Mg2 ＋、Taq 聚合酶浓度及退火 温度）进行了试验分析。试验结果表明，光皮树SSR-PCR 总体积为15 μL 的最佳反应体系为：模板DNA 用量 －1 －1 2 ＋ －1 37.5 ng，正反向引物浓度均为0.6 μmol ·L ，dNTPs 浓度为0.3 mmol ·L ，Mg 的浓度为1.5 mmol ·L ， Taq 聚合酶用量为1.5 U，最佳退火温度为50 ℃。运用优化了的光皮树SSR-PCR 反应体系，可从71 对引物中筛 选获得 11 对能适用于光皮树的SSR 引物。研究结果表明，试验所建立的反应体系可进一步用于光皮树SSR 遗 传多样性分析、遗传图谱构建和分子标记辅助育种等方面的研究中。 关键词：光皮树；SSR-PCR；引物筛选；正交优化试验 中图分类号：S603.2；S794.9 文献标志码：A 文章编号：1003—8981(2017)02—0078—06 Optimization and primer screening of SSR-PCR reaction system for Swida wilsoniana 1 1 2 1 1,XIA Li3 ZHANG Luhong , JIANG Lijuan , CHEN Jingzhen , YI Shiming , HUANG