第14章DNA的生物合成.ppt

真核生物DNA生物合成过程 The Process of DNA Biosynthesis in eukaryotes 第 四 节 1.复制时需要解开和重新组装核小体结构; 2.多起点复制 3.RNA引物及冈崎片段的长度均小于原核生物 4.真核生物染色体全部复制完成以前不会发动新一轮的复制. 真核生物与原核生物DNA复制的差异： 哺乳动物的细胞周期 DNA合成期 G1 G2 S M ? 细胞能否分裂，决定于进入S期及M期这两个关键点。与蛋白激酶活性有关。 ? 蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用。 ? 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 ? 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 ? 增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen, PCNA)在复制起始和延长中起关键作用。 （一）复制的起始 DNA-pol δ和pol α分别兼有解螺旋酶和引物酶活性。在复制叉及引物生成后，DNA-pol δ通过PCNA的协同作用，逐步取代pol α，在RNA引物的3?-OH基础上连续合成领头链。随从链引物也由pol α催化合成。然后由PCNA协同，pol δ置换pol α，继续合成DNA子链。 二、真核生物复制的延长发生DNA聚合酶α/δ转换 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 随从链 引物 核小体 （二）复制的延长 3? 5? 5? 3? 领头链 3? 5? 3? 5? 亲代DNA 后随链 引物 核小体 三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。 四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题 5? 3? 3? 5? 5? 3? 3? 5? + 5? 3? 3? 3? 3? 5? 5? 目 录 端粒(telomere) 指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构。 功能 ? 维持染色体的稳定性 ? 维持DNA复制的完整性 结构特点 ? 由末端单链DNA序列和蛋白质构成。 ? 末端DNA序列是多次重复的富含T、 G碱基的短 序列。 TTTTGGGGTTTTGGGG… 端粒酶(telomerase) 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白(human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 组成 引物酶(Primase) 5′ 5′ 催化RNA引物合成的酶叫引物酶，它是一种特殊的RNA聚合酶 DNA合成需在RNA引物的基础上进行 RNA引物 5′ 3′ 5′ 3′ 单链DNA结合蛋白（SSB） 作用：防止单链DNA重新形成双链，防止单链DNA被核酸酶水解 （协同效应） SSB 10 8 局部解链后 （二）DNA拓扑异构酶(DNA topoisomerase) 解链过程中正超螺旋的形成 目 录 拓扑异构酶作用特点 既能水解 、又能连接磷酸二酯键 拓扑异构酶Ⅰ 拓扑异构酶Ⅱ 分 类 拓扑异构酶Ⅰ 切断DNA双链中一股链，使DNA解链旋转不致打结；适当时候封闭切口，DNA变为松弛状态。 反应不需ATP。 拓扑异构酶Ⅱ 切断DNA分子两股链，断端通过切口旋转使超螺旋松弛。 利用ATP供能，连接断端， DNA分子进入负超螺旋状态。 作用机制 五、DNA连接酶 连接DNA链3?-OH末端和相邻DNA链5?-P末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成一条完整的链。 DNA连接酶(DNA ligase)作用方式 HO 5’ 3’ 3’ 5’ DNA连接酶 ATP ADP 5’ 3’ 5’ 3’ 目 录 DNA连接酶在复制中起最后接合缺口的作用。 在DNA修复、重组及剪接中也起缝合缺口作用。 也是基因工程的重要工具酶之一。 功能 提供核糖3?-OH 提供5?-P 结果 DNA聚合酶 引物或延长中的新链 游离dNTP去PPi (dNTP)n+1 连接酶 复制中不连续的两条单链 不连续→连续链 拓扑酶 切断、整理后的两链 改变拓扑状态 DNA聚合酶，拓扑酶和连接酶催化3?,5?-磷酸二酯键生成的比较 小 结 主要成员 主要作用 DnaA