四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究论文.docVIP

　　四嗪二甲酰胺体外诱导NB4细胞增殖、凋亡与分化作用的研究论文 周永列，吕亚萍，胡惟孝，邱莲女，王文松，吴建国， 刘建栋 【摘要】 为了观察四嗪二甲酰胺（ZGDHu-1)对白血病细胞株NB4的增殖、分化和凋亡作用，并对其作用机制进行初步探讨。将不同浓度的ZGDHu-1与NB4细胞在体外培养.freelRNA表达的变化。结果表明： ZGDHu-1对NB4细胞增殖和活力抑制呈时间和剂量的量效关系，48和72小时的IC50分别为450和200 ng/ml。 NB4细胞经ZGDHu-1作用后，大部分细胞阻滞于G2-M期，G0/1期细胞减少；细胞出现典型的形态改变，DNA片段化，亚G1峰检出并显著增加，Annexin-V/PI标记升高；Hoechst33258荧光染色后见凋亡细胞的特征性改变，这些均证实ZGDHu-1能诱导NB4细胞凋亡。NB4细胞经2-100 ng/ml ZGDHu-1作用3天后，细胞部分分化，NBT阳性率增加，细胞表面CD11b、CD13表达增高。ZGDHu-1作用NB4细胞后，bcl-2表达无变化，但bax表达显著增加，bax/bcl-2的比值升高，磷酸化P38MAPK表达增强，而磷酸化STAT3表达无变化，端粒酶hTERT-mRNA的表达随ZGDHu-1作用的浓度增加而显著下调。结论： ZGDHu-1能抑制NB4细胞增殖，诱导细胞分化，促进细胞凋亡，其机制可能与bax表达上调、P38MAPK活化增强和端粒酶逆转录酶受抑有关。 【关键词】 四嗪二甲酰胺；NB4细胞株；有丝分裂原激活蛋白激酶；bax/bcl-2; 端粒酶逆转录酶； 白血病 Effects of N,N＇-Di-(m-Methylphenyi)-3,6-Dimethyl-1,4-Dihydro-1,2,4,5-Tetrazine-1,4-Dicarboamide on Proliferation , Apoptosis and Differentiation of NB4 Leukemia Cells In Vitro AbstractThe purpose of this study -methylphenyi)-3,6-dimethyl-1,4-dihydro-1,2,.freelide(ZGDHu-1) on proliferation ， differentiation and apoptosis in NB4 human leukemia cell line and its possible mechanism. Different concentrations of ZGDHu-1 and the different time of cultivation ined by cell morphology, DNA agarose gel electrophoresis, DNA content, Annexin-V/PI and Hoechst33258 labeling method. The analysis of cell morphological change, expression of CD11b, CD13 and NBT reduction ed to evaluate the differentiation of NB4 cells. The expressions of bcl-2,bax and phosphorylated p38MAPK or STAT3 etry. APK activation and inhibition of hTERT-mRNA. Key itogen-activated protein kinase; bax/bcl-2; hTERT-mRNA; leukemia 四嗪是一类四氮杂苯化合物，一般都具有良好的生物活性。目前唯一作为药品上市的替莫唑胺（temozolomide）是一种咪唑四嗪类口服抗肿瘤药，属于不对称四嗪类化合物。四嗪二甲酰胺(ZGDHu-1)是一种新颖的对称四嗪化合物，是胡维孝等［1,2］改进了合成方法而设计并合成的经结构多种修饰的3，6-二甲基-1，4二氢-1，2，4，5-四嗪类化合物。经药物构效学筛选，其中ZGDHu-1具有较强的抗肿瘤作用［3］，有望成为一种具有自主知识产权的抗癌新药。为了研究ZGDHu-1抗血液肿瘤的作用及其作用途径，我们以急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4为模型，体外观察了ZGDHu-1对NB4增殖、分化和凋亡的作用，并探讨其作用的分子机制。 材料和方法 材料 ZGDHu-1由浙江工业大学药学院制药工程研究所合成，系白色片状结晶。用二甲亚砜溶解配制贮存液，浓度为1 mg/ml，应用液用含10%的小牛血清的RPMI 1640（Gib