垂盆草总黄酮的保肝降酶作用及其化学成分的鉴别研究论文.docVIP

　　垂盆草总黄酮的保肝降酶作用及其化学成分的鉴别研究论文 【摘要】 目的进一步验证垂盆草总黄酮的保肝降酶作用，鉴别并确证垂盆草总黄酮的化学组成，为垂盆草药材质量控制指标的确认和质量标准的研究奠定基础。方法通过CCl4造模，考察垂盆草总黄酮对小鼠血清转氨酶的影响及对肝脏的保护作用。采用HPLC法，通过与各对照品对照，确证垂盆草总黄酮的化学组成。结果垂盆草总黄酮能显著降低小鼠血清ALT和AST，并对肝脏有明显的保护作用;垂盆草总黄酮中至少含有槲皮素、山柰素、木犀草素等8种黄酮类化合物。结论垂盆草总黄酮是垂盆草中重要的保肝降酶活性部位之一，垂盆草总黄酮中至少含有槲皮素、山柰素、木犀草素等8种黄酮类化合物。这为确认垂盆草药材的质量控制指标以及制定科学的质量标准奠定了基础。 【关键词】 垂盆草; 总黄酮; 保肝降酶 ; 高效液相色谱法 垂盆草是景天科植物垂盆草Sedum sarmentosum Bunge的新鲜或干燥全草.freelpus DX60型显微镜，Olympus DP71型图像获取系统;QP-B1型切片漂烘温控仪，LEICA RM2145型石蜡切片机;LEICA TR1020 型组织处理仪;RE-52A型旋转蒸发仪; LXJ-IIB型大容量多管离心机等。 ALT试剂盒(批号、AST试剂盒(批号均购自南京建成生物技术研究所;石蜡、苏木素、伊红及中性树脂等由南京中医药大学形态学教研室提供;甲醇、乙腈等试剂为色谱纯，四氯化碳、乙醇、正丁醇、醋酸乙酯、甲醛等试剂为分析纯，均购自上海久亿化学试剂有限公司;硅胶G由青岛海洋化工厂生产(供薄层层析用);生理盐水(批号：2007092502)购自南京小营制药有限公司。垂盆草总黄酮(纯度92.2%，比色法测定)自制。 槲皮素对照品(批号：760701)，山柰素对照品(批号：0861-200002)，异鼠李素对照品(批号：0860-200103)，木犀草素对照品(批号：111520-200201)，金丝桃苷对照品(批号：1521-200202)，木犀草苷对照品(批号：1192-061019)，芦丁对照品(批号：086-9303)，槲皮苷对照品(批号：235-2003012)，甘草苷对照品(批号：200522)均购自中国药品生物制品检定所;5，4′-二羟基-3′，5′-二甲氧基黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(苜蓿苷)、5，4′-二羟基-8，3′-二甲氧基黄酮-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-3，7-二-O-β-D-葡萄糖苷均为自制品(经结构确证和归一化法纯度测定)。昆明种小鼠(体质量18～22 g，雌雄各半)由南京中医药大学实验动物中心提供。 2 方法和结果 2.1 垂盆草总黄酮的保肝降酶实验1～6 2.1.1 供试药物溶液的制备称取总黄酮粉末3.873 7 g(相当于200 g生药)，加0.5%羧甲基纤维素钠溶液至100 ml，制成每毫升相当于2 g生药的溶液。 2.1.2 剂量设计根据垂盆草药材的临床人用剂量，折算成小鼠剂量，取其5倍量、10倍量作为小鼠的给药剂量(经过预试验确定)，即高剂量50 g(生药)/kg，低剂量25 g(生药)/kg，再由总黄酮得率换算成供试药物溶液的给药量。 2.1.3 动物分组共分为正常对照组、模型对照组和垂盆草总黄酮高、低剂量组共4组，每组10只小鼠，雌雄各半。给药组给予相应剂量的供试药物，正常对照组和模型对照组给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液(20 ml/kg)。 2.1.4 给药方法及肝损伤模型的制备各组动物定时按剂量灌胃，1次/d，给药6 d，第1次给药前禁食不禁水24 h。末次给药1 h后，除正常对照组小鼠腹腔注射花生油(10 ml/kg)外，其余各组小鼠均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液(10 ml/kg)，注射后正常给食给水。 2.1.5 转氨酶测定腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液16 h后，小鼠眼眶后静脉丛取血，置37℃水浴中30 min，取出，以2 000 r/min离心10 min，分离血清，采用赖氏法测定ALT和AST活性。结果见表1。取血同时，取肝组织固定于10%甲醛溶液中，供做组织切片用。表1 垂盆草总黄酮对血清中ALT及AST的影响 2.1.6 肝脏病理切片检查取固定于10%甲醛溶液中的小鼠肝脏，按常规制备病理切片，置显微镜下观察，用Olympus DP71图像获取系统摄片。病理切片检查结果如下： 正常对照组：低倍镜下，肝脏结构正常，从肝被膜到整个肝实质组织(肝小叶、肝汇管区结构)未见任何病变。高倍镜下，肝小叶分界不明显，中央静脉未见扩张、淤血，肝细胞索结构、排列正常，肝细胞核圆，偶见双核。细胞质较疏松，未见肝细胞肿胀变性、坏死及炎性细胞浸润。肝血窦大小正常，