HPLC高效液相色谱故障排除经验.pptVIP

I. 常见问题 基线噪音 基线漂移 鬼 峰 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 峰 型 宽 峰 HPLC常见问题 系统压力问题 压力高 压力低或没有压力 压力不稳 流路基线噪音问题 基线不稳定(不重复) 长、短程振荡 基线漂移 噪音脉冲尖刺 HPLC常见问题分析 系统压力问题 压力高的原因 温度太低 流速太高 流动相粘度大 管路堵塞 仪器或色谱柱堵塞 压力传感器问题 HPLC常见问题分析(续) 系统压力问题 压力低或没有压力 温度太高;流速太低 泵关闭或保险丝断了 泵未输送流动相 ?储液瓶中无溶剂 ?低压限设置不当?泵未正确排气 ?溶剂入口过滤头堵 ?入口管路中有空气?泵失效 系统内有渗漏处 所用溶剂不正确 自动进样器在Purge时卡住 HPLC常见问题分析(续) 系统压力问题 压力不稳 压力传感器问题 泵排气不充分 泵失效 流动相未正确脱气 所用溶剂不混溶或易挥发 HPLC常见问题分析(续) 流路基线噪音问题 短程振荡 泵压不稳 泵入口管松,弯或堵塞 溶剂混合不充分 检测池中有大气泡 泵入口阀脏或失效 泵柱塞杆密封垫磨损 检测器出口溶液成滴状流入废液瓶 色谱图常见问题 色谱图常见问题主要有两类: 色谱峰峰形异常问题 例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等 色谱峰保留时间问题 保留时间不稳定等 色谱图常见问题分析(一) 色谱峰峰形异常问题: 色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解 流动相问题:泵未输液或流动相不正确 检测器设置不正确,或检测器有问题 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 峰比预想的要小 样品粘度过大 进样器有问题或进样体积有误 检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不正确 检测器输出未置零 用了不正确的检测器输出信号 检测池被污染 检测器的灯可能有问题 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 双峰或肩峰 进样量或样品浓度过大 保护柱或色谱柱进口堵塞 保护柱或色谱柱污染或失效 前伸峰 进样量或样品浓度过大 溶样的溶剂相对于流动相太强 保护柱或色谱柱污染或失效 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 拖尾峰 保护柱或色谱柱问题:污染或失效(选择合适的柱子) 进样问题 检测器时间常数不正确 平头峰 检测器设置不正确 进样体积太大或样品浓度太高 色谱图常见问题分析(二) 色谱峰保留时间问题: 保留时间飘忽不定(各次运行之间) 系统不稳定或未达化学平衡 泵压力不稳(泵头里有气泡) 进样体积过大或样品浓度过大 温度波动 流动相混合不均匀 色谱柱被污染 色谱图常见问题分析(二)(续) 色谱峰保留时间问题: 保留时间增加或减少(各次运行之间) 系统不稳定或化学平衡不足 泵流速变化 温度变化 色谱柱污染,柱效下降 流动相被污染 溶剂入口过滤器堵或管路堵塞 系统渗漏 色谱图常见问题分析(二)(续) 色谱峰保留时间问题: 保留时间改变到一个新的恒定值 流动相不正确或其组成不正确 泵流速变化 实际输液的流速不正确(泵失灵或故障) 环境温度变化；柱温不正确 色谱柱尺寸或类型不正确 色谱柱被污染 流动相含有稳定剂或稳定剂发生变化 输液系统的梯度滞后体积不正确 色谱图常见问题 色谱图常见问题主要有两类: 色谱峰峰形异常问题 例如负峰,宽峰,肩峰,双峰,峰形不对称等 色谱峰保留时间问题 保留时间不稳定等 色谱图常见问题分析(一) 色谱峰峰形异常问题: 色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解 流动相问题:泵未输液或流动相不正确 检测器设置不正确,或检测器有问题 一个或几个峰是负峰 流动相吸收本底高 进样过程中进了空气 离子对分离中的系统峰 样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 所有的峰均为负峰: 信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒 光学装置尚未达到平衡 所有的峰都是宽峰 系统未平衡或未达到化学平衡 溶样的溶剂比流动相强很多 色谱柱类型或尺寸不正确 色谱柱或保护柱被污染或降级 温度变化对色谱柱的影响 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 较早洗脱的峰呈宽峰 进样体积过大或样品浓度太高 进样器有问题,定量环(Loop)大小不合适 在线过滤器,保护柱,色谱柱或管路堵塞 管路问题:内径不对或切管不正确 管路连接问题:接头或锥箍不正确 检测器时间常数不正确 色谱图常见问题分析(一)(续) 色谱峰峰形异常问题: 峰比预想的要小 样品粘度过大 进样器有问题或进样体积有误 检测器设置不正确,定量环(Loop)体积不正确 检测器输出未置零 用了