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　　半叶马尾藻多糖对HL论文 唐慎华 贾秀红 朱淑霞 李建厂 陆羡 【关键词】 半叶马尾藻多糖；HL 【摘要】 目的 探讨半叶马尾藻多糖对HL60细胞CD11b、CD11a表达的影响。方法 MTT研究半叶马尾藻多糖对HL60细胞体外增殖的影响，采用流式细胞术研究对CD11b、CD11a表达的影响。结果 半叶马尾藻多糖能增高CD11b、CD11a的表达率，且作用随时间和浓度的增加而增强。结论 半叶马尾藻多糖在体外可影响HL60细胞CD11b、CD11a的表达，提示其在抗肿瘤方面有一定的开发应用前景。 【关键词】 半叶马尾藻多糖；HL60细胞；CD11b；CD11a 【Abstract】 Objective To explore the effect of sea Sargassum confusum on the expression of CD11band CD11a in HL60 cell. Method The MTT and FCM approaches edependent manner.Conslusion The seaia drug. 【Key Sargassum confusum,SP）研究其对HL60细胞CD11b、CD11a表达的影响。 1 材料与方法 1.1 药物与试剂 SP（广东医学院刘秋英硕士惠赠），RPMI1640培养基（Gibco Co,USA）， FITC 标记的鼠抗人CD11a 单克隆抗体 （Exalpha Biologicals Inc,USA），FITC标记的鼠抗人CD11b单克隆抗体（Exalpha Biologicals Inc,USA），FITC标记的非特异鼠抗人IgG2a（Exalpha Biologicals Inc,USA）。 1.2 主要仪器 OLYMPUS IMTI型倒置相差显微镜（Japan），EPICSXL流式细胞仪（Coulter Co,USA），丹尼酶标仪（MK3）(Denmark)，SI 1640液体培养体系，置37℃、5%CO2恒温培养箱中培养，隔天换液一次。实验选用对数生长期细胞。 1.3.2 MTT抑制实验：参照文献［1，2］，将细胞以2×105/ml密度接种于96孔培养板中，加入不同浓度的SP，置37℃、5%CO2孵箱中分别培养24、48、72 h后，每孔加入MTT（5mg/ml）20 μl,继续培养4 h，加入MTT裂解液（20% SDS +50%DMF+30%H2O）100 μl，37℃、5%CO2孵箱中孵育8h，酶标仪检测各组细胞的A630/A570值，计算抑制率(IR)。 抑制率（IR）＝（1－用药组A值/对照组A值）×100%。 1.3.3 FCM检测CD11b、CD11a的表达：取药物处理后的细胞悬液1000 r/min 离心5 min，PBS洗涤2次，并用PBS重悬细胞，调整细胞数为1×106 /ml，取100 μl 细胞悬液，加入10 μl CD11b单克隆抗体和10 μl CD11a 单克隆抗体；另取100μl 细胞悬液，加入10μl IgG2a作阴性对照，4℃避光孵育30 min，PBS洗涤2次，200目尼龙网过滤，上机检测。 1.3.4 统计处理：实验数据用x ±s表示，使用SPSS 11.5统计软件进行统计描述，采用单因素方差分析（OneTT结果 以不同浓度（0、50、100、200、400、800 μg/ml）的SP作用于HL60 细胞24、48、72 h，用MTT法检测其对HL60细胞增殖的影响，如表1，图1、2所示，随着SP浓度的增加和作用时间的延长，抑制率逐渐增加。当浓度为800 μg/ml，作用48 h时抑制率为（5130±310）%，与对照组相比差异有显著性（P 001）。其24、48、72 h的IC50为（77678±2830）μg/ml、（50897±2208）μg/ml、（35567±1023）μg/ml。 表1 SP对HL60细胞增殖的抑制作用（略） 注：与0 μg/ml组相比◇ P 005，◆ P 001； *F =156214，**F =47032, ***F =109831 图1 抑制作用的剂效曲线（略） 图2 抑制作用的时效曲线(略) 2.2 CD11b、CD11a的表达 结果如表2、3所示，随着药物浓度及作用时间的增加，CD11a、CD11b表达逐渐上升。 表2 SP对HL60细胞CD11a表达的影响（略） 注：与0 μg/ml组相比△P 005，◆P 001；与300 μg/ml组相比▲P 001，与500 μg/ml组相比★P 001 表3 SP对HL60细胞CD11b表达的影响（略） 注：与0 μg/ml组相比◇P