半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究论文.docVIP

　　半夏泻心方及配伍药组含药血清抑制人胃癌BGC823细胞增殖的实验研究论文 王萍，李娟，刘喜平，李德兴，高波 【关键词】 半夏泻 摘 要：目的：研究半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BGC823细胞增殖的影响 。方法：采用血清药理学方法和MTT法及台盼兰染色法观察半夏泻心方及其配伍药组对体外人胃癌BGC823细胞的敏感性及生长抑制作用。结果：辛苦组对人胃癌BGC823细胞的生长抑制作用最强，显著高于辛开组、苦降组、辛甘组、苦甘组、甘补组（P 0.05）。结论：半夏泻心方中对BGC823细胞增殖起主要抑制作用的药组为辛开、苦降的配伍形式。辛开、苦降配伍后（辛苦）有显著的协同增效趋势，而其他配伍药群可能存在拮抗作用。提示辛开苦降法可能是中医药防治胃癌的治则治法之一。 关键词：半夏泻心方；人胃癌BGC823细胞；配伍；生长抑制 半夏泻心方为传统经方，药少力专,配伍严谨.freelin，煎煮两次，每次 30 min，纱布粗滤去渣，全方药液浓缩为含生药2 g/mL，其他配伍煎液中生药量同原方，煎法相同，煎后浓缩体积与全方煎液相同，使各配伍组中生药浓度与全方中各相应生药浓度相同。 2.2 含药血清的制备 参照李振光等〔6〕文中的方法：每组选家兔2只，实验前禁食12 h，灌胃给药，各药物组每只家兔灌服试验药物，对照组给予相同体积的生理盐水。给药剂量：每次26 mL/kg，相当于60 kg成人日服用量的10倍；给药方式：连续灌胃3次，第1、2次间隔20 h，第2、3次间隔4 h；采血时间：第3次给药后2 h无菌条件下心脏采血。静置4 h，3000 r/min离心20 min，分离血清（药物血清，DS），同种条件下药物血清混匀，56 ℃条件下水浴30 min灭活，-20 ℃冰箱保存备用。经培养实验没有微生物生长。 2.3 细胞的培养 BGC823细胞（人胃癌细胞株），由兰州大学细胞室引进。将BGC823细胞用含有青霉素、链霉素各100 U/mL、15 %小牛血清的RPMI1640培养液培养。在5 %CO2、37 ℃培养箱中培养2~3 d后进行传代培养。 2.4 MTT法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BGC823细胞的敏感性 取对数生长期的BGC832细胞，细胞存活率达95 %以上，先用0.25 %胰蛋白酶消化培养细胞，再用含10 %胎牛血清的RPMI1640培养液配成单个细胞悬液，以每孔1×104个细胞接种于96孔培养板中，每孔体积200 μL。在细胞液中加入最终浓度分别为5 %、10 %的全方、辛开、苦降、辛苦、甘补、辛甘、苦甘的兔血清，各浓度设三个平行孔，并设正常兔血清对照组及5-FU阳性对照组，平行做3板，将培养板放入CO2培养箱，在37 ℃、5 %CO2及饱和湿度条件下分别培养24 h、48 h、72 h， 每孔加入MTT溶液（5 mg/mL）20 μL，37 ℃继续孵育4 h后，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液。每孔加入150 μL 二甲基亚砜（DMSO），振荡10 min，使甲充分溶解，在490 nm波长下，用酶联免疫检测仪测定各孔光吸收值（A），按下列公式求出细胞存活率。每个样品计数4次，根据3次实验结果求平均值和标准差(x-±s， n=3) 。细胞存活率=试验组光吸收值（A） 对照组光吸收值（A）×100 %x 2.5 台盼兰染色法测定半夏泻心方及配伍药组含药血清对BGC823细胞生长的影响取一瓶对数生长期的细胞，细胞存活率达95 %以上。用含有15 %小牛血清的RPMI1640培养液将细胞数调节为2×105~3×105/mL，接种于96孔塑料培养板中。在细胞液中加入最终浓度分别为20 %、50 %的全方、辛开、苦降、辛苦、甘补、辛甘、苦甘的兔血清。各浓度设三个平行孔，并设正常血清对照组。置37 ℃、5 %CO2培养箱培养24 h、48 h、72 h。取出后，加入4 %台盼兰染液，显微镜下计数存活细胞数。显色为蓝色的为死细胞，未显色的为活细胞，按下列公式求出细胞生长抑制率。每个样品计数3次，根据3次实验结果求平均值和标准差(x-±s ，n=3)。 细胞生长抑制率（%）=对照组活细胞数－实验组活细胞数 对照组活细胞数×100 2.6 统计学方法 各组数据均用（x-±s）表示，用SPSS10.0统计软件进行统计分析。采用方差分析(ANOVA)进行显著性检验，多组间比较采用q检验。 3 结果 3.1 半夏泻心方及配伍药组对BGC823细胞敏感性的影响 表1半夏泻心方及配伍药组含药血清对BGC823细胞敏感性的影响 注：与空白组比较*P 0.05，**P 0.01；与辛苦组比较 △ P 0.05,△△ P 0.01；与全方组比较▲ P 0.05,▲▲ P 0.01 如表1所示：与正常组比较，半夏