半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究论文.docVIP

　　半边旗水溶性成分对不同肿瘤细胞生长抑制作用的研究论文 刘义 龚先玲 梁念慈 【关键词】 半边旗；,.freelor Effects of Soluble ponents of Pteris . semipnnata L. against Various Tumor Cells Abstract：ObjectiveTo study the antitumor effects of the soluble ponents of Pteris semipnnata L. (PsL)on various tumor cells. MethodsCell groediated by the soluble ponents of PsL easured by MTT assay and Trypan Blue exclusion. ResultsThe effects of the soluble ponents of PsL on groent or cells. Key ipnnata L; Soluble ponents; Antitumor 半边旗Pteris semipnnata L. (PsL）是一种民间草药，属凤尾蕨科植物，性寒，具疏解风寒、化湿消味、消热解毒的功效。近年来我实验室的研究表明半边旗具有显著的体内外抗肿瘤作用［1~3］.freela公司；超级无支原体新生牛血清购自杭州四季青生物材料有限公司；RPMI-1640购自美国 Hyclone公司；胰酶购自美国 Gibco公司；其余试剂均为国产分析纯。人肝癌 BLE-7402细胞、人肺腺癌 A549细胞、人慢性粒细胞白血病细胞 K562细胞由本室传代。 1.2 方法 1.2.1 半边旗水溶性成分的提取经 CO2超临界萃取后半边旗残渣5 g，加10倍量95% 乙醇水浴回流，微沸1h，滤纸过滤，收集滤液；将滤渣再加10倍量95%乙醇，水浴回流微沸1 h，滤纸过滤，得滤液。合并两次所得滤液，回收乙醇得浸膏，加50ml三蒸水，离心10min（2000 r/min），取上清，制成浓度为100 mg生药 ml-1的溶液，过滤除菌备用。 1.2.2 细胞培养 BLE-7402，A549，K562细胞培养于含10%小牛血清，100 kU L-1青霉素和100 mg L-1链霉素的 RPMI-1640培养液中，37℃、5% CO2饱和湿度细胞培养箱培养。取对数生长期细胞用于实验。 1.2.3 MTT法［6］取对数生长期的期 BLE7402，A549细胞，用0.25%胰蛋白酶消化，RPMI-1640完全培养液调制成5.0×104个 ml-1细胞悬液，接种于96孔板中，每孔接种100 μl（含5.0×103个细胞）。培养过夜后，吸出培养液，加入新培养液90 μl及不同浓度的半边旗水溶性成分溶液10 μl，使终浓度分别为1.25，1.75，2.50，5.00 mg生药 ml-1。同时设置空白及5-Fu阳性对照孔，对照组则加入相同体积的培养液，每一浓度设8个平行孔。继续培养24 h。每孔加入MTT(5 g L-1)20 μl，继续培养4~6 h。每孔加入 DMSO 100 μl。在微型振荡器上摇匀15 min，结晶溶解后，立即比色，用 ELX800型酶标仪在主波长为570 nm，参比波长为630处测量OD值，比色以空白孔调零。抑制率=（1-实验组8孔OD值平均值/对照组8孔OD值平均值）×100%。 1.2.4 Trypan Blue拒染法选取对数生长期的K562细胞,调整细胞浓度至4.4×105个 ml-1，每孔450 μl接种于24孔板中，使每孔的细胞数为2×105个 。然后，加入不同浓度的受试化合物。每个浓度设3个平行孔，同时设置空白及5―― Fu阳性对照孔。将培养板放入37℃，5%CO2饱和湿度孵箱中继续培养24 h后每孔加入50 μl 0.4% Trypan Blue溶液染色。镜下计数，检测活细胞数。抑制率=（对照组3孔活细胞数平均值-实验组3孔活细胞数平均值/对照组3孔活细胞数平均值）×100%。 2 结果 2.1 半边旗水溶性成分对人肺腺癌 BEL-7402细胞生长的抑制作用半边旗水提物作用于人肝癌 BLE-7402细胞24 h，能明显地抑制其增殖，且呈剂量依赖关系。结果见表1。 表1 半边旗水提物对 BEL-7402细胞生长的抑制作用(略) 与空白组比较，*** P＜0.001 2.2 半边旗水溶性成分对人肺腺癌 A549细胞增殖的抑制作用从表2可以看出，半边旗水提物能明显地抑制其增殖，且呈剂量依赖关系。 表2 半边旗水提物对A549细胞增殖的抑制作用(略) 与空白组比较，*** P＜0.001 2.3 半边旗水溶性成分对人慢性粒细胞白