大孔树脂分离治伤灵口服液中芍药苷的研究论文.docVIP

　　大孔树脂分离治伤灵口服液中芍药苷的研究论文 于波涛 姜云平 张勤 陈冬琴 江宗婷 【摘要】 目的 研究D101大孔树脂对治伤灵口服液中芍药苷的吸附性能及分离纯化的工艺参数。方法 采用HPLC法测定芍药苷含量，通过考察pH值对吸附的影响、吸附容量、洗脱剂选择及其用量等因素对芍药苷分离纯化的影响，确定工艺参数。结果 D101大孔树脂对芍药苷的适宜交换吸附条件为pH=4，最大上柱量以芍药苷计为3.661mg·g-1树脂，水洗除去杂质，洗脱剂为40%乙醇溶液，用量为8个柱体积（BV）。结论 D101大孔树脂能提高芍药苷纯度，为芍药苷含量测定提供保证。 【关键词】 D101大孔树脂 芍药苷 治伤灵口服液 分离 治伤灵口服液是在桃红四物汤的基础上研制而成的复方制剂.freelm×300mm）；D101型大孔树脂（成都市科龙化工试剂厂，批号；芍药苷标准品（中国药品生物制品检定所，批号：110736-200731）；甲醇为色谱纯；水为重蒸水；95%乙醇（药用，成都市蓉康医疗保健实业有限公司）。 2 方法与结果 2.1 芍药苷的含量测定 2.1.1 供试液的制备 按处方比例称取药材，其中当归、川芎、柴胡等提取挥发油，药渣与剩余药材混合，加水8倍量，煎煮3次，每次1 h，合并滤液，将其浓缩为1.10～1.14 g·ml-1的浸膏，放冷，加入乙醇使醇沉浓度为70%，静置48小时后滤过，滤液回收乙醇，放冷，加入炼制好的蜂蜜，混匀，再缓缓加入挥发油及0.04%对羟基苯甲酸乙酯，加水至全量，调节pH 值，搅拌均匀，即得。 2.1.2 阴性对照溶液的制备 按比例称取除赤芍以外的处方药材，按供试液的制备方法制备。 2.2.3 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品10mg于100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度。 2.2.4 色谱条件［1］ 色谱柱：Agilent Zorbax SBC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），流动相：甲醇水（35∶65），流速：1ml·min-1，检测波长：λ=230 nm，柱温：30℃。 图1 芍药苷色谱图（略） （A.标准品；B.阴性对照；C.供试品；1.芍药苷） Fig 1 HPLC chromatogram of paeoniflorin (A. reference substance；B. negative sample； C.sample； 1. paeoniflorin) 2.2.5 绘制标准曲线 按上述色谱条件，分别进样对照品溶液2、4、8、10、12、16 μl，记录峰面积（Y），以芍药苷的进样量(X，μg)为横坐标，对应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y =1449.9X+8.2337，相关系数r=0.9999。结果表明，在0.2 μg～1.6 μg范围内芍药苷含量与峰面积成良好线性关系。图1为芍药苷的色谱图。 2.2.6 仪器精密度试验 取对照品溶液10μL,.freell于10ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液10μL,分别于0，1， 2， 4， 8 ，12 h进样测定，计算峰面积的RSD值, 芍药苷的RSD为 0.766%。表明样品溶液在12 h内稳定。 2.2.8 最低检测限 将芍药苷对照品溶液稀释进样,以信噪比为3∶1，芍药苷最低检测限为18.54 ng。 2.2.9 回收率试验 采用加样回收率方法，精密量取已知含量样品共9份，定量加入芍药苷对照品，测定含量。结果见表1。 表1 加样回收率试验结果（略） Tab.1 The recovery test of paeoniflorin 2.3 大孔树脂的预处理 取适量D101大孔吸附树脂，95%的乙醇充分浸泡后并用乙醇多次洗涤，直至上清液于试管中加入适量蒸馏水无白色浑浊为止，再用去离子水洗至无明显乙醇气味即可，最后转入酸碱处理，即用5%的盐酸溶液浸泡3 h，然后用去离子水洗至pH值为中性，接着用5%NaOH溶液浸泡3 h，然后用去离子水洗至pH值为中性即可。 2.4 吸附条件的确定 2.4.1 酸碱对芍药苷稳定性的影响 分别精密量取0.2 mol·L-1NaOH溶液、氨试液、0.2 mol·L-1HCl溶液与芍药苷标准溶液（0.1 mg·ml-1）等量混合，每0.5 h测定一次含量。结果，1 h后，NaOH溶液和氨试液中芍药苷被降解完全，而HCl溶液中芍药苷含量为原来的99.85%，无明显变化。 2.4.2 pH对D101大孔树脂静态吸附芍药苷的影响［2］ 准确称取吸干表面水分的活化处理树脂8份,每份5g，分别置于50 ml锥形瓶中，各加入pH值分别为3、4，5，6，7的供试液14 ml，每个pH值平行操作三份，室温下每隔30