天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究论文.docVIP

　　天然脑活素促细胞增殖和抗细胞衰老作用的研究论文 李映红 吴正治 吴伟康 李明 张晓丽 陈茵 杨敏 【摘要】 目的：探讨天然脑活素对人胚肺二倍体成纤维细胞（MRC-5）增殖能力和复制性衰老的影响及其机理。方 法： 光镜下观察 MRC-5 细胞衰老表型，常规计数细胞代龄、传代速度， MTT 法检测细胞增殖活度，X-Gal 染色法观察细胞衰老情况，计数衰老细胞百分率。 结果：天然脑活素可维持细胞的非衰老表型，增加 MRC-5 细胞代龄，天然脑活素 孵育 MRC-5 细胞的细胞增殖能力较空白老龄对照组明显升高（P ＜ 0.05），细胞的增殖速度显著加快。另外.freelan embryonic lung diploid fibroblasts (MRC-5 cells) and its mechanism. Methods To observe the changes of senescent phenotype by light microscope, count the passage ages and velocity, detect the potential of cell proliferation by MTT. The changes of cells senescence of Natural Cerebrolysin-effected MRC-5 cells ethod, and the positivecell rates of senescence cells aintainedunaltered cell morphology and increased life span of MRC-5 by at least 18-21 passages. paring cells, the proliferation potential of MRC-5 cells incubated cells (P 0.01). In addition, the positive cell rate of senescence cells ultigeneration culture in Natural Cerebrolysin than those of control senium cells (P 0.01), and similar to those of young cells. Conclusion As a result, ote the proliferation activity of MRC-5 cells and delay the cells replicative senescence efficiently. 〔Key RC-5）为研究对象，观察了天然脑活素对 MRC-5 细胞表型、细胞代龄、传代速度、细胞生长增殖能力及衰老相关指标的影响，旨在探讨其延缓 MRC-5 细胞复制性衰老的作用及其机理。 1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 细胞株与动物 MRC-5 细胞是人胚肺成纤维细胞，由美国 ATCC 细胞库提供（ATCC No: CCL-171），并规定 28 代及以下为年轻细胞，50 代及以上为老年细胞，采用含 10% 胎牛血清（FBS）的 EMEM 培养液培养。 新西兰家兔，雄性，体重（1.5±0.2）kg，购自广东省医学实验动物中心，经 1 周的适应性饲养之后进行实验。 1.1.2 药品及试剂 研究用药天然脑活素由深圳市中西医结合临床研究所进行生药鉴定并由西安杨森制药厂制备成临床安全级粉剂，纯度为 98%。 胎牛血清、EMEM 培养基购自美国 Gibco 公司。MTT 购自 Sigma 公司。β- 半乳糖苷酶细胞化学染色试剂盒购自美国 KPL 公司。其他试剂均为国产分析纯级。 1.1.3 主要仪器 BIO-RAD 680 型酶联免疫检测仪（USA），Leica DM16000B 型图象分析系统（Germany），SANYO MCO-15AC 型二氧化碳培养箱（Japan）。 1.2 方法 1.2.1 实验分组 共分 5 组，年轻对照组；空白老龄对照组；天然脑活素低剂量组；天然脑活素中剂量组；天然脑活素高剂量组，年轻对照组和空白老龄对照组以含 10% 正常空白血清的 EMEM 培养，天然脑活素低、中、高剂量组分别以含 2.5%、5%、10% 天然脑活素含药血清的 EMEM 培养液培养，血清含量不足 10% 的用正常空白血清补充。 1.2.2 实验含药血清的制备 含药血清的制备：将雄性新西兰家兔随机分为天然脑活素灌胃组、空白对照灌胃组，每组 6 只，根据成人治疗量换算为家兔用量灌胃。每个家兔每天灌药量相当于上述配成的成药液 2~3 mL 。连续灌胃 1 个