携带CTLA4Ig基因腺病毒载体对共同导入致敏大鼠脊髓的LacZ基因表达的影响.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………．．．…………………………1 英文摘要……………………………………………………………………………4 研究论文携带CTLA419基因的重组腺病毒靶向导入致敏的大鼠脊髓 腰膨大内对共同导入的LacZ基因在局部表达的影响 前言………………………………………………………………………………………8刖舌………………………………………………………………………………………8 材料与方法…………………………………………………………………9 结果………………………………………………………………………………………17 附图………………………………………¨……………………………………………20 附表………………………………………………………………………………………28 讨论………………………………………………………………………………………28 结论………………………………………………………………………………………32 参考文献………………………………………………………………………32 综j苤……………………………………………………………………………………………··35 致谢……………………………………………………………………………………………··47 个人简历…………………………………………………………………………48 中文摘要 I 携带CTLA4g基因的重组腺病毒靶向导入致敏的大鼠脊髓腰膨 大内对共同导入的LacZ基因在局部表达的影响 摘 要 目的：随着社会的发展，各种创伤发生越来越多，伴随的神经系统 损伤的数量也迅速的增加。但由于神经系统修复的复杂性和特殊，神经系 统损伤的修复至今仍是一个非常棘手的难题。随着分子生物学的发展，对 于神经系统损伤的修复采用基因治疗的方法，将外源性的神经营养因子的 基因通过载体定向的导入神经断端，利用受体细胞长期的高效的分泌神经 营养因子，促进神经再生轴突的生长，从而促进神经损伤的修复，以期获 得良好的效果。虽然利用转基因技术为神经的损伤修复提供了一个非常好 的方向，但由于受体对外源性基因及载体的免疫排斥作用，使得外源性基 因的长期高效的表达不能实现，这也就限制了神经修复的效果。针对这一 瓶颈，本实验采用导入带有细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(C T 4 ytotoxiclymphocyte-associatedantigen 基因腺病毒AdV(Ad 量注射器共同导入大鼠脊髓腰膨大处作为实验组，将未携带外源性基因的 脊髓腰膨大处作为对照组，两组通过比较p．gal在脊髓表达的变化，并通 过多聚酶链反应(PCR)监测腺病毒注入后在脊髓量的变化及消失时间和 的作用及其机理。 将大鼠随机分成四组，A，B每组21只，C，D组每组6只。在往大鼠脊髓 注射病毒之前7天，在胸背侧皮下注射AdLacZ 1“l进行预处理。对照 mg／kg)，麻醉成功后固定于脑立体定位仪上。取长约3cm后正中切口， 去除T13椎板暴露脊髓腰膨大部位。利用微量注射器及ST．III型手动推 中文摘要 09 d0(5×109pfu／m1)各1gl(A组、C组)或AdLacZ(1×1pfu／m1)和A dCTLA4Ig(5×109 行进针，斜行刺入深度为2．Smm。注射速度为1“l／min，注射完毕后滞 。针5min，缓慢拔针。充分止血、冲洗切口，局部喷洒抗生素预防感染， 关闭切口。逐层关闭切口，结束手术。自然条件下恢复清醒，相同条件 下喂养进行观察。C组和D组于距第一次手术30天后于脊髓后正中动 pfu／m1)各1 ul(D组)。其余手术方法相同。实验组和对照组在转