毒毛旋花子苷原引起海马神经元细胞内钙变化机制研究.pdfVIP

目 录 中文摘要…………………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………”5 研究论文毒毛旋花子苷原引起海马神经元细胞内钙变化机制研究 l1 前言………………………………………………………………………………………·1日U舌………………………………………………………………………………………‘1 材料与方法…………………………………………………………………·13 结果………………………………………………………………………………………·17 附图………………………………………………………………………………………21 附表………………………………………………………………………………………·26 讨{仑………………………………………………………………………………………·29 结论………………………………………………………………………………………·33 参考文献…………………………………………………………………·34 致谢………………………………………………………………………………………………50 1 个人简历……………………………………………………………………………5 中文摘要 毒毛旋花子苷原引起海马神经元细胞内钙变化机制研究 摘 要 的跨膜蛋白，在跨膜转运中维持Na+、K+的离子梯度，这种梯度对调节渗 透压的平衡、静息电位的水平和生电性细胞(组织)如神经和肌肉的兴奋 结合的化学物质，可在许多生理和病理条件下调节Na+，K+．ATP酶。在脑 酶被抑制，导致细胞内[Ca2+】i升高，从而引起细胞的损伤，故NKA是参与 神经元损伤的机制之一，本研究主要选取对缺血、缺氧敏感的海马神经元， 细胞内钙的影响，并分析其作用机制。 方法：①海马神经元的原代培养：取出生24小时内的乳鼠，断头， 4～5倍组织块体积的O．125％的胰蛋白酶，37℃，消化10分钟，种植液冲 洗3次后，用火焰刨光的玻璃吸管吹打制成细胞悬液，用种植培养液将细 胞培养板中，3～5小时后给细胞补液。24小时后，全量换成饲养液，以 后每3天换1次液，培养至7．14天用于实验。②激光共聚焦扫描显微镜 Fluo．420 测定海马神经元[Ca2+】i的变化： pmol／L37℃孵育神经元40 比值R表示(R=Ft／Fo)。 结果：1神经元的形态学观察接种后1--2小时海马神经元开始贴 壁，细胞呈圆形或椭圆形，3天后，多数细胞从胞体长出数个突起，在7～lO 天开始成熟，胞体逐渐长至30--409m，晕光明显，胞核和核仁清晰可见， 突起变粗、变长并且有分支，14天后神经细胞生长最为丰满，胞体呈圆 形或多角形，四周晕光明显。Fluo．4负载后，可在共聚焦显微镜下观察到 海马神经元细胞胞浆内的绿色荧光。 中文摘要 2Str对海马神经元细胞内钙的影响 灌流海马神经元，实验结果表明，给药前海马神经元的平均荧光强度为 用越大。 3谷氨酸释放对Str诱导的海马神经元细胞内钙升高的影响 mol／L和10～mol／L，10瑙mol／LStr可抑制 实验选用Str的浓度为10。8 高亲合力Na+，K+．ATP酶Q2和0【3亚基的活性，10。5mol／LStr可抑制低亲 (50 给予Str+D．APV(50肛M)和Str+CNQX(10 导[Ca2+】i的升高无明显影响。 4细胞外钙对Str诱导的海马神经元细胞内钙升高的影响 海马神经元用正常的HBSS灌流5分钟后，将灌流液换成含钙离子螯 合剂EGTA 化的比值是1．063：L-0．005(pO．01)，高浓度的Str(10。5 的升高参与