淋巴瘤细胞中PTPROt基因的甲基化状态及其意义.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………1 英文摘要……………………………………………………………………4 研究论文淋巴瘤细胞中PTPROt基因的甲基化状态及其意义 前言……………·一…·“一一··……”··…“…”·………““．．．．一一……8刖舌”一…””“””～””一“””…”””…“…”””“”一“““”一一……芍 0OOOOOOO……”·8 材料与方法…………”·………………………………0 结果…·········…··········……··…···…一·······…“一””…．．”…”·15 附图…………………………………………………………………17 附表“一””一””一””一””一一””””一””一”“一“”一“”．．””一”…24 讨论”一…””一”“一”“一““一一…”一“”．．””一”“一”“一””一””·26 参考文献……………………………………………………………29 综述 甲基化与淋巴瘤…………………………………………………32 致谓}·········…········一··…····”···”·…···“”·…一一“一“““”“…一“．．·41 6oOOO……………………………………………………42 个人简历………1 中文摘要 淋巴瘤细胞中PTPROt基因的甲基化状态及其意义 摘 要 目的：淋巴瘤是血液系统常见的恶性肿瘤之一，研究发现在淋巴瘤 细胞中存在全体基因组的低甲基化和局部CpG岛异常高甲基化，已经 发现很多基因的启动子高甲基化与淋巴瘤相关，这些基因参与很多的已 知的细胞信号传导通路，如降钙素，控制细胞生长的调节因子p15，p16， 及已经被人们所认知的抑癌因子ARF，BLU。这些基因与细胞的生长， 增殖，分化，胚胎发育及机体免疫等生物学功能等密切相关。 PTPRO(受体型酪氨酸磷酸酶)是新发现的PTP成员之一，是 JAK．STAT信号传导途径的负调控因子之一，在调控细胞生长，增殖， 分化，胚胎发育及免疫等生物学功能方面发挥重要的作用是一个潜在的 抑癌因子。其截短型PTPROt仅限于造血细胞的表达，特别是淋巴细胞， 通过表达谱芯片及组织微阵列技术证实该基因在恶性淋巴瘤细胞系及 某些白血病细胞系中表达明显下降，该基因的沉默可导致相关信号转导 分子活性增强从而促进肿瘤细胞的恶性增殖。 本实验以淋巴瘤病人的淋巴结组织以及淋巴瘤细胞株为研究对象， 旨在研究PTPROt在淋巴瘤病人和炎性及反应性增生的病人中的表达情 况及其各自的甲基化状态，同时对淋巴瘤细胞株应用不同浓度的去甲基 mRNA的表达情况和甲基化状 化药物干预不同的时间后，比较PTPROt 态的改变以及细胞株的增殖和凋亡情况。 方法：l收集病理诊断明确未经治疗的淋巴瘤及炎性和反应性增生 病人的淋巴结组织，以炎性和反应性增生病人作为对照组，用半定量和 荧光实时定量PCR的方法分别检测PTPROt基因在淋巴瘤病人组和炎性 及反应性增生病人的表达情况。 养，每2．3天传代1次，实验使用对数生长期的细胞。当细胞生长达到一 定数量时应用不同浓度的去甲基化药物5．杂氮．27．脱氧胞苷对其处理，在 中文摘要 不同的时段收取细胞检测其PTPROt基因的表达水平。 3从淋巴结组织中及药物干预后的淋巴瘤细胞株中提取DNA进行 甲基化PCR(MSP)，检测淋巴瘤病人组，炎性和反应性增生病人组及 淋巴瘤细胞株中PTPROt基因的甲基化状态。 另设两个复孔。分别作用24h，48h，72h三个不同的时间，用二苯基溴化 四氮唑蓝法(MTT)检测细胞经药物干预后的增殖情况。 5调整细胞密度为5．O×105／ml，接种于6孔无菌培养板中，应用不同 亡，检测细胞凋亡的情况。 结果：l应用半定量PCR检测淋巴瘤病人和炎性及反应性增生的病 人，在读胶仪下发现炎性及反应性增生的病人在213bp处存在明显的扩 增条带，而