第13章DNA分子标记（选修）.ppt

1、概述 2、DNA分子标记的种类与特点 3、DNA分子标记的优点 4、几种DNA分子标记的原理 5、分子标记在果树上的应用 一、概述 　 1、遗传标记的概念：是指与目标性状紧密连锁、同该性状共分离且可遗传的等位基因变异。是指能明确反映遗传多态性的生物特征。 　　 孟德尔的实验材料－豌豆高茎或矮茎、红花或白花、黄色圆粒或绿色皱粒等。 　　 摩尔根的实验材料－白眼雄果蝇和红眼雌果蝇。 　 2、特点 多态性－不同物种或同一物种不同类群或个体之间，在某个遗传标记上存在明显差异。 稳定性（可遗传）－遗传标记能稳定地从亲代传递给子代并且表现出来。 共显性－每一世代中无论是纯合还是杂合状态，某一性状的遗传标记均能将它们区分开来。 易观察－肉眼或通过简单的检测能将性状的差异显示出来。 　3、遗传标记的作用 用来研究生物的遗传与变异规律。主要应用于连锁分析、基因定位、遗传作图及基因转移等。 在现代分子育种研究中，遗传标记的应用已成为基因定位和辅助选择的主要手段。 A、形态标记(Morphological Markers) ：指能够明确显示遗传多态性的外观性状，如果实大小、颜色、形状、叶片形状等相对差异（典型的形态标记能用肉眼即可识别和观察）。 广义的形态标记：生理特性、生殖特性、抗病虫性等。（必须借助简单的测试） 带型：染色体经特殊染色显带后，带的颜色深浅、宽窄和位置顺序等，如C带、N带、G带等。 　 酶作为遗传标记是在Markert and Moller(1959)提出了同工酶 的概念后迅速发展起来的。 　同工酶（isozyme）：具有相同的催化功能而结构及理化性 质又不同的一类酶。 　 等位酶(allozyme)：同一基因位点上不同等位酶基因编码的 同种酶的不同分子形式。 同工酶的应用比较广泛，动植物的居群遗传学和进化研究，栽 培植物种质资源的研究、开发和利用等方面。 　蛋白质标记是基因表达的产物，受环境的影响较小，能更好的反映遗传多样性。 　 蛋白质标记的不足：数量较少，尽管至今发展了57种酶系统，大约可以鉴定100个左右的基因座位，针对特定的作物来讲，仅有10~20种同工酶可用。 　　每一种同工酶的染色方法不同。 　　有组织表达和时空表达特异性。 花粉粒的大小、形状， 萌发孔的数量、形状； 花粉外壁的饰纹，包括：条瘠隆起程度、走向、多少等， 穿孔的大小、多少、形状等。 均可作为遗传标记应用于各个方面。 5、 理想的遗传标记的特点 1）多态性高-----表现出差异的特征较多； 2）客观-----受主观因素和环境因素的影响要小； 3）便于检测-----即差异比较明显或通过简单的仪器； 4）可比性-----所得到的数据在不同实验室中能交流。 二、DNA分子标记的种类与特点 　1953年，Watson和Crick提出了DNA分子结构的双螺旋模型，圆满解释了DNA就是基因的有机化学实体，宣布了分子遗传学时代的到来。 　　　分子标记：能反映生物个体或群体间基因组中某种差异特征的DNA片段，它直接反映基因组间的差异。 　　1980年，人类遗传学家Bostein等首先提出了DNA限制性酶切片段长度多态性（RFLP）作为遗传标记的思想。 　1985年，PCR技术的出现，大大促进了DNA分子标记的发展。Mullis等发展的一种聚合酶链式反应（polymerase chain reaction, PCR），实质是体外合成特异性DNA片段。 　分成三步：变性、退火、延伸。 　PCR产物以指数方式即2n递增。 　如：经过30~35个循环，可将2kb的DNA片段从原来的1pg扩增到0.5~1μg（100万倍） 1990年，RAPD（Random amplified length polymorphism）:随机扩增的多态性 1993年，AFLP (Amplified fragment length polymorphism):扩增片段长度多态性 1993, SSR (simple sequence repeats):微卫星DNA又叫简单重复序列 1994年，ISSR (Inter SSR)、AP-PCR, DAF, SCAR, SNP (single nucleotide p