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实验2 蛋白质含量测定重点讲义
实验二 蛋白质含量测定;要求：
计算蛋白质含量
线性方程R20.95;1、任务背景
蛋白质是生物体和生物样品的重要组成部分，蛋白质含量直接关系到生物体代谢状况生物制品的质量，所以蛋白质检测十分重要。目前蛋白质含量的检测，采用的国家标准是凯氏定氮法，此法的缺点：
①样品需要消化处理，时间长，测定过程烦琐。
②测定的是含氮化合物（其中包括一些非蛋白氮），结果为粗蛋白含量。
③适用于常量成分检测。
常用的其他方法：
①双缩尿法（Biuret法）：1~2mg
②Folin－酚试剂法（Lowry法）：50~100μg
③紫外吸收法：5μg
④考马斯亮蓝法（Bradford法）：1~5μg
2、任务目标
①学习分光光度计的使用原理，练习其使用方法。
②掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法。
3、工作原理
蛋白质含有两个以上的肽键，因此有双缩脲反应。在碱性溶液中蛋白质与Cu2+形成??红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关，因此被广泛地应用。在一定的实验条件下，未知样品的溶液与标准蛋白质溶液同时反应，并于540nm下比色，可以通过标准蛋白质的标准曲线求出未知样品的蛋白质浓度。除－CONH－有此反应外，－CONH2－，－CH2－NH2，－CS－NH2等亦有此反应。
;实验步骤;实验步骤;实验步骤
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