同一组织来源的肝癌干细胞分化能力异质性的体外研究-中国医药生物技术.PDF

中国医药生物技术 2014 年 6 月第 9 卷第 3 期 Chin Med Biotechnol, June 2014, Vol. 9, No. 3 161 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.03.001 ·论著· 同一组织来源的肝癌干细胞分化能力 异质性的体外研究 刘虹麟，许世清，彭亮，王在，房青，娄晋宁，秦蕾，王培刚，张文健 【摘要】 一。近年来的研究认为肿瘤干细胞（cancer stem 目的 通过比较肝癌干细胞的不同单细胞克隆的体外分化 cells，CSCs ）不仅是导致肿瘤异质性的根源，而且 能力，分析同一组织来源的肿瘤干细胞分化能力是否具有异 其本身对化疗极为不敏感，是肿瘤复发、转移和耐 质性，以进一步明确肿瘤干细胞的分化特性，为靶向肿瘤干 药的关键因素。如何杀灭或减少 CSCs 已成为肿瘤 细胞的治疗提供实验依据。 治疗中不可忽视的重要问题。近年来，利用 CSCs 方法 通过有限稀释法对肝癌干细胞进行单细胞克隆培养， 具有分化能力的特点，通过诱导 CSCs 分化可以促 获得的单细胞克隆通过 MTT 测定比较其增殖能力。然后分 进其对化疗药物的敏感性[1]，并减少 CSCs 的数量 [2] 别挑选增殖速度较快和较慢的 3 个克隆，采用 RT-PCR 方 以改善疗效 。 法比较其干细胞标志物表达水平。对干细胞标志表达水平高 对 CSCs 的分化特性进行深入研究是建立以 的 3 个克隆（A2 、A3 和 B2 ）进行向成骨、软骨和脂肪 CSCs 分化为目标的治疗手段所必需的。目前对各 方向的诱导分化。采用实时荧光定量 PCR 方法检测诱导前 种组织来源 CSCs 的表型和自我更新及起始肿瘤 后成骨、软骨和脂肪标志分子的表达。 能力的研究较多，但对 CSCs 分化能力的研究相对 结果 获得的 20 个单细胞克隆增殖能力不同，并且增殖能 薄弱。CSCs 具有非常复杂的生物学特性，甚至来 力快的克隆表达干细胞标志物 CD133 、Oct4、c-kit、SCF、 源于同一组织的肿瘤干细胞群也存在表型差异[3] 。 nestin 比增殖能力慢的克隆强。向成骨方向诱导后，A2 、 但对同一肿瘤组织中的 CSCs 在分化能力上是否 A3 和 B2 克隆 I 型胶原 mRNA 表达水平分别升高了 具有异质性还不清楚。向间充质分化是 CSCs 分化 （4.71 ± 0.11 ）、（2.13 ± 0.15 ）和（3.82 ± 0.3 ）倍；骨钙素 能力的重要体现，本研究对同一组织来源 CSCs 的 mRNA 的表达水平分别升高（8.55 ± 0.18 ）、（7.02 ± 0.03 ） 单细胞克隆进行间充质分化能力的比较，分析 和（7.91 ± 0.09 ）倍，说明 A2 克隆向成骨细胞分化能力最 CSCs 是否具有分化异质性。为阐明 CSCs 的分化 强。向软骨方向诱导后，B2 分化能力最强，软骨标志分子 特性和建立促进 CSCs 分化的治疗措施提供实验 蛋白聚糖和 II 型胶原的表达分别上调（25.01 ± 0.19 ）倍和 依据。 （17.49 ± 0.19）倍，而在 A2 未发生明显变化，A3 只轻微 上调。向脂肪方向诱导后，A2 、A3 和 B2 克隆脂联素 1 材料与方法 mRNA 表达水平分别升高了（6.12 ± 0.15 ）、（11.45 ± 0.36） 1.1 主要试剂和仪器