第二十八篇食品功能性成分的测定.docVIP

第二十八章 食品功能性成分的测定 本章要点 低聚糖的测定方法 大豆异黄酮的测定方法 总皂苷的测定方法 褪黑素的测定方法 肉碱的测定方法 免疫球蛋白IgG的测定方法 EPA和DHA的测定方法 超氧化物歧化酶的测定方法 总谷胱甘肽（GSH）含量的测定方法 10.大蒜辣素含量的测定方法 11.核苷酸含量的测定方法 12.糖精含量的测定方法 13.牛磺酸含量的测定方法 14.甘草苷含量的测定方法 15.膳食纤维含量的测定方法 16.枸杞子多糖含量的测定方法 17.香菇多糖的测定方法 18.磷脂含量的测定方法 19.花生四烯酸含量的测定方法 20.β-胡萝卜素含量的测定方法 21.维生素E和胡萝卡素含量的测定方法 22.微量硒含量的测定方法 23.有机锗含量的测定方法 24.茶多酚含量的测定方法 25.儿茶素含量的测定方法 低聚糖——低聚果糖和异麦芽低聚糖 的测定方法(高效液相色谱法) 本方法适用功能性食品中低聚糖的检测。 一、方法提要 低聚糖各组分用高效液相色谱法分离并定量测定，以乙腈、水作流动相在碳水化合物分析柱上糖的分离顺序是先单糖后双糖，先低聚后多聚，以示差折射检测器检测。 低聚糖的检测有外标法和内标法，但由于功能性食品一般只需报告低聚糖的总量，故可用厂家提供的基料作对照样，在相同的分离条件下以面积比值法求出样品中低聚糖含量。 二、仪器 1.高效液相色谱仪：Waters HPLC，510泵，410示差折射检测器，数据处理装置。 2.超声波振荡器。 3.微孔过滤器(滤膜0.45μm)。 三、试剂 1.乙腈(色谱纯)。 2.水（三蒸水并经Milli-Q超纯处理）。 3.低聚糖对照品：低聚糖难得纯品，故可用厂家提供的基料。 为对照品。 低聚果糖（Fructooligosaccharide）：国产：一般含蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）、蔗果五糖（GF4）。 液状基料：含量约＞35%。 固状基料：含量约＞50%。 进口：从蔗果三糖（GF2）至蔗果七糖（GF6）有液状、固状，30%～96%多种规格。异麦芽低聚糖：有液状、固状，一般含量＞50%。 4.对照样品溶液 根据保健食品所强化的品种，准确称取低聚果糖或异麦芽低聚糖基料分别于100mL的容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，配成低聚果糖约5～10mg/mL或异麦芽低聚糖约5～10mg/mL的对照样品溶液。 四、测定步骤 1.样品处理 胶囊、片剂、颗粒、冲剂、粉剂（不含蛋白质）的样品 用精度0.000lg的分析天平准确称取已均匀的样品(由于低聚糖原料含量不一，样品中的强化量也不同，所以样品的称量应控制在使低聚糖最终的进样浓度约5～10mg/mL为宜)，于100mL容量瓶中，加水约80mL于超声波振荡器中振荡提取30min，加水至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤后直接这样测定。 奶制品（含蛋白质）的样品 准确吸取50mL于小烧杯中，加25mL无水乙醇，加热使蛋白质沉淀，过滤，滤液经浓缩并用水定容至25mL刻度。 饮料或口服液样品 准确吸取一定量的样品，加水稀释，定容至一定体积使低聚糖的最终进样浓度约5～10mg/mL。 果冻或布丁类样品 果冻类样品先均匀搅碎，称量，加适量水并加热至60℃左右助溶．并于超声波振荡器中振荡提取，然后用水稀释至一定体积。 布丁类样品可按奶制品处理。 2.色谱分离条件 色 谱 柱：Waters碳水化合物分析柱3.9mm×300mm。 柱 温：35℃。 流 动 相：乙腈+水（75+25）。 流 速：1～2mL/min。 检测器灵敏度：16X。 进 样 量：10～25μL。 3.样品测定 取样品处理液和对照品溶液各10～25μL注入高效液相色谱仪进行分离。以对照品峰的保留时间定性，以其峰面积计算出样液中被测物质的含量。 低聚糖的分离顺序为： 低聚果糖：果糖+葡萄糖、蔗糖、蔗果三糖（GF2）……蔗果七糖（GF6） 异麦芽低聚糖：葡萄糖、麦芽糖、异麦芽糖、潘糖（pentose）、异麦芽 三糖、异麦芽四糖、异麦芽四糖以上。 五、结果计算 低聚糖占总糖的百分含量 因为各组分均为同系物，所以可用面积归一法计算低聚糖各组分总面积值及各组分占固形物（总糖）的百分含量。 低聚果糖占总糖%= 式中 Sl——果糖+葡萄糖的峰面积； S2——蔗糖的峰面积； S3+……S7——蔗果三糖（GF2）……蔗果七糖（GF6）的峰面积。 异麦芽低聚糖占总糖%= 式中 Sl——葡萄糖的峰面积； S2——麦芽糖的峰面积； S3+……S7——异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖、异麦芽四糖