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DNA/RNA同步纯化试剂盒说明书 产品组成 NA同步纯化试剂盒次制备纯化柱 β-巯基乙醇 Buffer RLT Buffer WA Buffer WBR RNase-Free Water 说明书 μl 4 ml 3 ml 2 ml 1.5 ml 1份 50套 50套 5个 500 μl 32 ml 24 ml 19 ml 2 ml×3 1份 ℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品适合从中分离纯化NA。经后的蛋白与PCR抑制物过滤除去RNase-Free Water洗脱，即可用于各种分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 乙醇 RNase-free 1.5ml离心管 移液器及吸头（为避免的污染，选用含有滤芯的移液器吸头） 一次性手套及防护用品和纸巾 台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 旋涡震荡器 使用前准备 如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。 μl β-巯基乙醇，混合均匀。加入β-巯基乙醇的Buffer RLT一个月内使用不影响实验结果。 根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WBR中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。1. 在研钵中加入约200~400 mg切成碎屑的动物组织和液氮，将组织研磨至粉末状，再用液氮预冷的1.5 ml离心管称取20~25 mg研磨成粉末状的组织。 * 研磨组织时应及时补加液氮，避免组织融化，以免内源性的RNA酶恢复活性而降解RNA。 * 勿使用超过25 mg组织，否则可能导致DNA纯化柱堵塞，并使纯化的RNA中混有基因组DNA污染。 2. 加入μl已经加入了β-巯基乙醇的Buffer RLT，旋涡振荡* Buffer RLT具腐蚀性，请戴防护用品进行操作。 DNA纯化: 3. 13000 rpm 离心13000 rpm 离心* 勿吸取管底沉淀，以免堵塞DNA纯化柱。 RNA纯化: 4．向滤液中加入600 μl 70％乙醇并直接用吸头吸注6~8次混合均匀，吸取600 μl混合液加入到RNA纯化柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心* 加入70％乙醇混合后如果有沉淀产生，请将沉淀一起加入到核酸纯化柱中。 5. 弃2ml 离心管中的滤液，将纯化柱置回到2ml 离心管中，13000 rpm 离心弃2ml 离心管中的滤液，将纯化柱置回到2ml 离心管中，* 滤液无须彻底弃尽，避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。6.在纯化柱中加入500 μl Buffer WA, 盖上管盖，1000 rpm 离心 * 确认在Buffer WA中已经加入无水乙醇。. 弃2ml 离心管中的滤液，在纯化柱中加入00 μl Buffer WBR, 盖上管盖，1000 rpm 离心 * 确认在Buffer WBR中已经加入无水乙醇。 . 弃2ml 离心管中的滤液，将纯化柱中置回到2ml 离心管中，14000 rpm 离心1分钟。* 如果离心机的离心速度达不到14000 rpm，则用最高速离心2分钟。 * 请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的PCR效果。. 弃2ml 离心管，将纯化柱中置于一个洁净的1.5ml离心管中，在纯化柱的膜中央0 μl RNase-Free Water，加入0 μl RNase-Free Water，室温静置分钟，1000 rpm 离心 * 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将000 rpm 离心，以免1.5ml离心管管盖脱落而损伤离心机。10. 弃纯化柱，洗脱的NA可立即用于各种分子生物学实验；或者将NA储存于-0℃备用* 即使RNA电泳检测观察不到DNA条带，也不应认为纯化的RNA中不含基因组DNA污染，如需要彻底除去DNA，请用不含RNA酶的DNase I 消化残留的DNA。 细胞中DNA/RNA同步纯化操作步骤： 1. 在1.5 ml离心管中收集≤1×107 培养细胞，翻转离心管弃培养液（培养液无需弃尽）。旋涡震荡* 勿使用过量的细胞，否则可能导致后续的操作步骤中堵塞纯化柱。 ※细胞收集方法： a) 悬浮培养的细胞：300×g离心5分钟收集约1×107 培养细胞，弃培养液。 b) 贴壁培养的细胞：用胰酶消化或者细胞刮刀刮取的方法收集约1×107培养细胞，300×g离心5分钟，弃上清液。 2. 加入μl已经加入了β-巯基乙醇的Buffer RLT，旋涡振荡. 将细胞的溶解物全部转移到DNA纯化柱中，盖上管盖，13000 rpm 离心μl 70％乙